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TRPC6介导肺动脉高压大鼠肺动脉张力和肺动脉平滑肌细胞Ca~(2+)浓度的升高
经典瞬时感受器电位通道6(transient receptor potential channel 6,TRPC6)蛋白是受体操纵性Ca~(2+)通道(ROCC)的分子基础.本文旨在研究TRPC6/ROCC在野百合碱(monocrotaline,MCT)诱发的肺动脉高压大鼠模型中的作用.Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组(CON组)和MCT组,CON组正常饲养三周,而MCT组按60mg/kg剂量一次性腹腔注射2%MCT,建立MCT诱导的慢性肺动脉高压大鼠模型.通过测定右心室收缩压(RVSP)和右心室重量指数(RVMI)、HE染色观察肺动脉血管形态,分析肺动脉结构重建.半定量RT-PCR和Western blot检测大鼠肺动脉TRPC6 mRNA和蛋白表达水平.血管张力实验中用可特异性激活ROCC、可透膜的DAG拟似物1-oleoyl-2-acetyl-sn-glycerol(OAG)检测大鼠离体肺动脉环的收缩效应.用荧光探针Fluo3-AM测定OAG诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)胞浆游离Ca~(2+)浓度([Ca~(2+)]_i).结果显示,与CON组相比,MCT组的RVSP、RVMI均明显增高(P<0.01);形态学观察可见肺小动脉平滑肌层明显增厚,管腔减小:TRPC6的mRNA和蛋白质表达无明显变化.在CON组,OAG几乎不引起肺动脉环收缩,而在MCT组,肺动脉环的收缩反应显著增强,差别有显著性意义(P<0.01).相比较于CON组,MCT也可使OAG触发的PASMCs[Ca~(2+)]_i增量值显著升高(P<0.05).上述结果提示,MCT预处理对肺动脉TRPC6 mRNA和蛋白质水平的表达无显著增强效应,但可促进TRPC6/ROCC介导的PASMCs Ca~(2+)内流和肺动脉张力升高,诱导大鼠产生肺动脉高压,并进一步诱发肺血管及右心室重构.
关键词： 经典瞬时感受器电位 钙离子 受体操纵性Ca~(2+)通道 野百合碱 -
慢性低氧大鼠 TRPC1表达与肺动脉收缩变化时间曲线关系
目的：探讨慢性低氧（chronic hypoxia，CH）上调 TR-PC1表达和 SOCE 介导肺动脉（pulmonary arteris，PAs）收缩的时间曲线。方法清洁级♂ SD 大鼠，常压低氧（氧分压为9.5％～10.5％）饲养，观察在不同时间点 CH 对 TRPC1表达量和 SOCE 介导的 PAs 收缩的影响，描记其时间依赖性曲线。结果① CH 上调平均右心室收缩压（mRVSP），低氧1 d 压力增高明显，7 d 达到大值，21 d 后达到稳定；右心室质量指数（RVMI）低氧3 d 后开始增高，此后一直呈持续增高状态，直到21 d 达到稳定；②半定量 RT-PCR 检测显示， CH 上调 TRPC1 mRNA 的表达量，低氧1 d 上调明显，3 d 达到大值一直维持到7 d，21 d 后达到稳定；③ CH 上调SOCE 介导的 PAs 收缩，低氧3 d 开始上调，7 d 达到大值，21 d 后达到稳定。结论CH 早期 TRPC1／SOCE 明显上调，两者的时间曲线具有相关性，表明 TRPC1和 SOCE 的上调在慢性低氧致肺高压的机制中发挥着重要作用。
