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CFP-10蛋白(71-85)文献资料
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结核分枝杆菌特异性分泌抗原克隆和融合表达及抗原性鉴定
目的融合表达结核分枝杆菌分泌蛋白CFP 10-ESAT-6或ESAT-6 CFP 10,研究其免疫学特性,为结核病的血清学诊断提供物质基础.方法将一个柔性的氨基酸"接头"插入原核表达载体pET32c(+)中,构建pET32c(+)-linker.PCR法扩增CFP10、ESAT-6基因.将CFP10克隆入改建的载体pET32c(+)的linker前,ESAT-6克隆入linker后,构建CFP10-ESAT-6融合基因;或将ESAT-6克隆入改建的载体pET32c(+)linker前,CFP10克隆入linker后,构建ESAT-6-CFP10融合基因,分别转化大肠杆菌XL1-blue,抽提质粒,酶切鉴定;在大肠肝菌BL21中表达,通过Western blot分析其抗原性.结果二个目的基因分别被按顺序成功克隆入载体pET32c(+)的linker前或后.重组质粒pET32c(+)-CFP10-ESAT-6或pET32c(+)-ESAT-6-CFP10靶基因的测序结果与预计序列完全一致.融合蛋白在BL21菌中高效表达.Western blot分析表明,融合蛋白与活动性肺结核患者血清能发生特异性免疫反应. 结论成功地构建了多抗原基因DNA质粒;pET32c(+)-CFP10-ESAT-6或pET32c(+)-ESAT-6-CFP10质粒在BL21菌中能高效表达rCFP10-ESAT-6或rESAT-6-CFP10融合蛋白,该蛋白兼具CFP10和ESAT-6二种蛋白的抗原性.本研究为rCFP10-ESAT-6或r ESAT-6-CFP10融合蛋白在结核病血清学诊断的中应用奠定了基础.
