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SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测类风湿关节炎患者血清miR-146a的表达及意义
目的 用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR法检测类风湿关节炎(RA)患者血清miR-146a的表达水平,探讨其在RA诊断中的意义.方法 以U6为内参照,用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测RA患者48例(活动期30例、缓解期18例)、骨性关节炎(OA)患者22例和体检健康者25例血清miR-146a的表达水平,并进行ROC曲线分析;对各组进行红细胞沉降率(ESR)检测.结果 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测结果表明,活动期RA患者血清miR-146a水平为(2.42±0.75),显著高于缓解期RA患者(1.66±0.29)、OA患者(1.12±0.43)和体检健康者(1.01±0.34),差异均有统计学意义(P均＜0.05);miR-146a诊断活动期RA的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.914(95％ CI:0.872 ～0.926);以1.96为cut off值,敏感性为95.0％、特异性为87.5％、准确性为91.9％.活动期RA组ESR为(37.5±5.2) mm/h,缓解期RA组为(14.4±4.7)mm/h,OA组为(11.6±5.1) mm/h,健康对照组为(9.6±3.9) mm/h,各组间差异有统计学意义(F=177.01,P＜0.01).结论 建立的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR可用于RA患者血清miR-146a的检测.miR-146a可用于诊断活动期RA.
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SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测宫颈癌血清中miR-21的表达
目的 建立SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR法检测宫颈疾病患者血清中miR-21的表达水平,探讨miR-21在宫颈癌临床监测中的意义.方法 设计miR-21、U6茎环逆转录引物和PCR扩增引物,以U6为内参,用实时荧光定量PCR检测32例不同宫颈疾病患者血清中miR-21表达水平.结果 建立的实时荧光定量PCR法能特异地检测血清中的miR-21扩增信号,熔解曲线单一,产物特异.宫颈癌患者血清中miR-21水平明显高于子宫肌瘤、宫颈炎等其他良性宫颈疾病(P＜0.05),而宫颈癌患者手术切除后血清中miR-21水平明显下降(P＜0.05).结论 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR是一种快速简便、敏感性高、特异性好的检测方法,对宫颈癌早期诊断、分子分期和预后判断有很好的应用前景.
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poly(A)加尾的实时荧光定量PCR检测血清miR-124a表达及临床初步应用
目的 建立ploy(A)聚合酶加尾的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法检测血清微小RNA(miR)-124a,并作临床初步应用.方法 用Trizol试剂提取血清总RNA.miR-124a ploy(A)聚合酶加尾逆转录获得cDNA,进行SYBR Green Ⅰ实时定量PCR扩增检测.制作C.elegans-miR-39模拟物浓度梯度稀释的标准曲线,定量血清中miR-124a的表达水平.结果 该方法能定量检测血清miR-124a表达水平,熔解曲线呈单峰,PCR扩增产物特异,在103～106 copies/uL范围内有良好的线性关系(r2 =0.999),并且检测重复性好.糖尿病患者血清中miR-124a表达水平明显高于健康体检者(P＜0.05).结论 所建立的ploy(A)聚合酶加尾SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法能敏感、特异地检测血清中miR-124a的表达水平,为下一步临床应用的研究奠定了方法学基础.
