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生物淘筛文献资料
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噬菌体抗体库筛选技术
噬菌体抗体库技术,能够绕过免疫动物和细胞融合等过程制备单克隆抗体,并能通过在原核细胞体系中抗体片段的克隆选择,分离得到几乎所有抗原的人源性抗体[1].因此,已成为生命科学研究的突破性进展之一.
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噬菌体呈现技术在肿瘤研究中的应用
随着噬菌体呈现技术的日益广泛应用,其在肿瘤的研究中也发挥了越来越大的作用.用于生物淘筛的靶标包括肿瘤相关抗原、各种肿瘤相关生长因子、受体、酶类及肿瘤细胞、肿瘤组织血管等.通过此技术也发现了一些肿瘤组织特有的分子标识物,从而为肿瘤的靶向化疗及发现新的生物分子打下了良好的基础.
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靶向巨噬细胞膜蛋白Vsig4特异性纳米抗体的构建和筛选
目的：构建 V-set and immunoglobulin domain containing 4(Vsig4)特异性纳米抗体，以期作为巨噬细胞的分子探针。方法用 Vsig4重组蛋白对羊驼进行免疫，分离血液中的淋巴细胞，利用噬菌体展示技术，构建噬菌体展示文库，经过连续3次生物淘筛获得与 Vsig4蛋白结合的噬菌体，经测序和基因比对所得 VHH 序列，用 ELISA法筛选出抗 Vsig4的高亲和力纳米抗体，并用 Vsig4稳定表达细胞系验证纳米抗体的结合能力。结果成功构建了插入率为70%、库容量为7.27×107的噬菌体表达文库，经过克隆筛选获得136个 Vsig4阳性单克隆，经测序获得15个不同的VHH 基因，将这些基因克隆至原核表达体系，表达和纯化后获得了高纯度的 Vsig4纳米抗体，其中 Nb119的亲和力高，并且可以与 Vsig4稳定表达细胞系结合。结论成功构建并筛选了特异性、高亲和力的 Vsig4纳米抗体，以期用于检测巨噬细胞表面 Vsig4的表达和构建特异性分子探针。
