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β-碳酸酐酶(β-CA)文献资料
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日本血吸虫潜在药物靶点β-碳酸酐酶的表达与鉴定
目的 原核表达日本血吸虫(Schistosoma japonicum)潜在的药物靶点β-碳酸酐酶(β-CA)并测定其催化活性.方法 根据β-CA保守序列,在日本血吸虫基因组中鉴定β-CA序列,核酸序列全合成后将其导入原核表达系统进行融合表达.SDS-PAGE及Western blotting鉴定表达蛋白后,采用Ni亲和层析方法纯化目的蛋白,并测定碳酸酐酶活性.结果 cDNA序列Sjp_0056790.1具有β-CAs的保守序列;成功将该核酸序列导入重组表达载体pET-32a(+)-SjaCA中;SDS-PAGE和Western blotting检测结果显示融合蛋白分子量大小约为38 kDa;碳酸酐酶活性测定结果显示该蛋白具有碳酸酐酶活性,且该活性受乙酰唑胺抑制.结论 Sjp_0056790.1编码日本血吸虫β-CA,本研究成功表达了具有催化活性的日本血吸虫的β-CA,为后续的药物筛选奠定了基础.
关键词： 日本血吸虫 β-碳酸酐酶(β-CA) 药物靶点 表达 活性测定
