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G蛋白偶联受体5在宫颈癌组织中的表达及其对宫颈癌细胞的促生长作用
目的：探讨G蛋白偶联受体5（LGR5）分子在宫颈癌患者病理组织的表达规律及其意义。方法选择由31例Ⅲb期宫颈癌患者癌瘤和癌旁组织构建的组织芯片，以兔抗人LGR5抗体为第1抗体和辣根过氧化物酶标记的抗兔抗体为第2抗体进行免疫组织化学染色，并采用Aperio病理扫描系统结合2名病理科医师进行读片和结果分析；而后，采用免疫荧光染色和流式细胞术检测LGR5分子在宫颈癌细胞株HeLa细胞膜的表达；进而采用0、0.2、1、5 ng/mL等不同浓度的人R-脊椎蛋白1（RSPO1）刺激HeLa细胞，采用细胞计数法观察HeLa细胞的增殖情况。结果宫颈癌组织鳞状上皮LGR5染色强度31例均为Ⅰ级，癌旁鳞状上皮组织LGR5染色27例为Ⅰ级，4例为0级。LGR5分子在宫颈癌组织的表达率为（70.00±4.57）%，明显高于其在癌旁组织的表达率（23.39±4.20）%（P＜0.01）。宫颈癌细胞株HeLa细胞膜表达LGR5分子，RSPO1可在体外促进HeLa细胞增殖。结论干细胞标记分子LGR5表达于宫颈癌组织，并参与宫颈癌细胞的增殖。LGR5是宫颈癌临床靶向干预的可能靶点。
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Rspo1基因转染间充质干细胞株的构建及生物学活性鉴定
目的：构建稳定表达Rspo1的基因转染间充质干细胞株。方法将人Rspo1全长cDNA重组入逆转录病毒载体pEGZ-Term，通过与辅助病毒载体共转染293T细胞，包装为具有感染力的完整重组病毒载体，收集培养上清感染间充质干细胞C3H10 T1/2细胞株，筛选获得G418抗性的基因转染细胞，通过RT-PCR与流式细胞术检测感染后C3H10 T1/2细胞Rspo1分子的表达，并采用细胞计数法观察其上清对SW480结肠癌细胞增殖能力的影响。结果成功构建pEGZ-Term/Rspo1逆转录病毒表达载体，获得了稳定表达人Rspo1的基因转染细胞株C3H10/Rspo1，该细胞株上清能促进SW480结肠癌细胞增殖。结论建立了稳定表达Rspo1的基因转染间充质干细胞株，为进一步利用Rspo1和间充质干细胞靶向作用于肠道干细胞救治肠上皮损伤的研究奠定了基础。
