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小鼠多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族分子进化的初步研究
目的 探讨小鼠多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族成员间的同源性,揭示其进化规律.为多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族各成员间结构相似但功能不同的特征提供一定的依据.方法 采用生物信息学软件和网上数据库对核酸、蛋白质序列进行同源比较,结构域分析和进化树绘制.结果 小鼠多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族一级结构、二级结构均有较高的同源性,系统进化树显示各成员来源于同一祖先并在不同时期分野.结论 各成员来自于同一祖先的同一家族,结构相似,但其进化方式属于趋异性进化.
关键词： 多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶 同源性 结构域 系统进化树 -
人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族分子进化的初步研究
目的:探讨人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族成员间的同源性,揭示其进化规律.方法:采用生物信息学软件和网上数据库对核酸蛋白质序列进行同源比较,结构域分析和进化树绘制.结果:人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族一级结构、二级结构均有较高的同源性,系统进化树显示各成员来源于同一祖先并在不同时期分野.结论:各成员来自于同一祖先的同一家族,其进化方式属于趋异性进化.
关键词： 多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶 序列比较 结构域 系统进化树 -
多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2酵母双杂交载体构建及激活检测
目的: 为探讨O-糖基化在肿瘤发生发展及转移中的作用,构建pGADT7/ppGalNAc-T2载体,并转化酵母AH109进行激活检测.方法: 采用PCR技术从pDONR201-T2得到ppGalNAc-T2全长编码序列,亚克隆至酵母双杂交载体pGADT7,醋酸锂法转染酵母AH109,并进行激活检测.结果: 酶切图谱分析和基因测序证实pGADT7/ppGalNAc-T2载体构建成功.并转化酵母AH109,激活检测呈阴性.结论: 成功构建了pGADT7/ppGalNAc-T2载体,并进行了激活检测,为进一步研究ppGalNAc-T2的功能奠定了基础.
关键词： 多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶 O-糖基化 酵母双杂交 激活检测 -
人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2基因反义RNA表达质粒的构建及克隆鉴定
目的:研究反义封闭ppGalNAc-T2基因表达对胃癌细胞GC7901细胞增殖以及肿瘤细胞生物学行为的影响,构建反义表达载体并转染胃癌细胞GC7901.方法:在对几种肿瘤细胞的ppGalNAc-T2基因的表达水平分析后,以高表达ppGalNAc-T2的人胃癌细胞GC7901的总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增两段不同长度ppGalNAc-T2基因片段,构建反义表达载体并转染胃癌细胞GC7901,通过G418筛选,建立一系列旨在封闭胃癌细胞GC7901细胞pp-GalNAc-T2基因表达的亚细胞克隆.通过荧光显微镜、RT-PCR技术手段检测封闭反义ppGalNAc-T2基因RNA表达.结果:ppGalNAc-T2反义表达质粒载体pEGFP-FDT2和pEGFP-FXT2经限制性酶切及部分序列分析证明基因已正确插入载体中,荧光显微镜及RT-PCR显示转染成功.结论:成功构建了ppGalNAc-T2反义表达质粒载体,反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达后,胃癌细胞GC7901ppGalNAc-T2的含量明显降低,为进一步研究ppGalNAc-T2奠定了基础.
