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肾损伤分子1在低渗造影剂肾病模型大鼠肾组织的表达及缺氧诱导因子1α对其的影响
目的:观察低渗造影剂碘必乐诱导的造影剂肾病大鼠肾小管上皮细胞损伤情况和肾损伤分子1(kidney injury molecule-1,KIM-1)的表达以及缺氧诱导因子1α上调对其的影响.方法:清洁级雄性SD大鼠45只,分为对照组(CON组,n=15),造影剂肾病模型组(CM组,n=15)及氯化钴预处理组(Cocl_2+CM组,n=15).为建立造影剂肾病大鼠模型,应用碘必乐(3 gI/kg)前,依次尾静脉注射吲哚美辛(INDO,10 mg/kg)和左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME,10 mg/kg).分别于造模后第2h、12h、24h、48h、72h处死动物,并检测血肌酐值,HE染色评估肾小管损伤程度,免疫组化、Western Blot及Real time-PCR方法测定肾组织中KIM-1蛋白及mRNA表达水平.结果:(1)与对照组相比,CM组造模后第2h、12h血清肌酐值无显著性差异(P＞0.05),24h、48h、72h均显著升高(P值均＜0.01),显示造模成功,Cocl_2+CM组较同一时间点CM组血清肌酐值显著下降(P＜0.01);(2)HE染色可见CM组24h、48h、72h均出现不同程度的急性肾小管损伤,伴有上皮细胞刷状缘脱落、空泡变性、细胞脱落及再生,部分肾小管结构破坏,髓质区病变较皮质病变更严蕈;Cocl_2+CM组较同一时间点的CM组肾损伤评分显著降低(P＜0.05);(3)免疫组化、Western Blot和Real time-PCR结果表明,自造模后2h始,CM组较阴性对照组大鼠肾组织KIM-1蛋白及mRNA表达水平均显著增加(P＜0.05),而Cocl_2+CM组较同一时间点的CM组KIM-1表达水平显著减少(P＜0.05).结论:低渗造影剂碘必乐诱导的急性肾小管上皮细胞损伤大鼠肾组织KIM=1表达水平显著增加,较血肌酐更早的反映.肾损伤,上调肾组织HIF-1α表达可以减轻肾小管上皮细胞损伤,KIM-1表达亦相应降低.
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蛋白激酶C-β2信号通路在糖尿病肾病的肾小管上皮细胞损伤的研究进展
蛋白激酶C-β2(PKC-β2)是蛋白激酶的常规异构体,蛋白激酶C的亚型之一.PKC-β2在高血糖条件下高表达,可引发多种糖尿病并发症,主要为心血管并发症,还包括肾病、神经病变、视网膜病变等.选择性抑制PKC-β2将是治疗糖尿病以及糖尿病相关并发症的有利途径之一.由于蛋白激酶C异构体之间高度的序列相似性,选择性地抑制PKC-β2较为困难,但仍有望在近期实现.近年来关于PKC-β2参与糖尿病肾病的研究越来越多,未来有希望成为治疗糖尿病肾病重要的靶点.
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microRNA-709负性调控线粒体功能参与肾小管上皮细胞损伤
目的 探讨microRNA-709(miR-709)在顺铂引起肾小管上皮细胞损伤模型中的作用及机制.方法 体外培养小鼠肾小管上皮细胞,予不同浓度(0、1、5、10、20 μmol/L)顺铂刺激24 h,以10 μmol/L顺铂刺激不同时间(0、2、6、12、24 h).采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测细胞miR-709的表达变化.实验组分为上调对照组、miR-709过表达组、下调对照组、miR-709下调组,其中miR-709下调组和下调对照组加顺铂刺激.应用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,分光光度法检测含半肮氨酸的天冬氨酸水解酶(Caspase-3)活性,Western blot法和RT-PCR检测上皮细胞标志蛋白E-cadherin及其mRNA的变化.JC-1(线粒体膜电位)荧光探针检测线粒体膜电位,流式细胞术检测线粒体超氧化物(mitoSOX)生成,PCR检测线粒体基因(mtDNA)拷贝数.结果 miR-709在5 μmol/L顺铂刺激小管上皮细胞后开始明显升高(F =22.17,P＜0.05),10μmol/L顺铂刺激12 h开始明显升高(F=33.462,P＜0.05);过表达miR-709后细胞凋亡数目、Caspase-3活性较上调对照组增加,E-cadherin表达较上调对照组下降,差异均有统计学意义(凋亡:1.54±0.20比1.00±0.23;Caspase-3活性:1.27±0.08比0.97 ±0.08;E-cadherin:0.47 ±0.15比1.00±0.10;t=-3.086、-5.882、5.671,P均＜0.05);线粒体功能指标线粒体膜电位、mtDNA拷贝数较对照组降低,mitoSOX生成较对照组增加,差异均有统计学意义(JC-1:0.80±0.04比1.05±0.08;mtDNA:0.58 ±0.15比1.00±0.75;mitoSOX:1.31±0.16比1.00±0.05;t =4.687、4.943、-3.694,P均＜0.05).而顺铂刺激后,miR-709下调组细胞凋亡数目、Caspase-3活性较下调对照组降低,E-cadherin表达较下调对照组增高,差异均有统计学意义(凋亡:1.35±0.10比1.86±0.44;Caspase-3活性:1.04±0.12比1.30±0.09;E-cadherin:0.86±0.08比0.54±0.05;F=18.489、20.932、33.323,P均＜0.05);线粒体膜电位、mtDNA拷贝数较对照组增加,mitoSOX生成较下调对照组降低,差异均有统计学意义(JC-1:0.94±0.06比0.75±0.05;mtDNA:0.68±0.09 比0.27±0.12;mitoSOX:0.91 ±0.09比1.22 ±0.08;F =21.726、59.330、23.813,P均＜0.05).结论 miR-709可能通过负性调控线粒体功能参与顺铂引起的肾小管上皮细胞损伤.
关键词： 顺铂 线粒体功能 microRNA-709 肾小管上皮细胞损伤 -
Prohibitin1和Prohibitin2在缺氧性肾小管上皮细胞损伤中的表达及作用
目的 探讨Prohibitn1( PHB1)、Prohibitin2( PHB2)在缺氧性肾小管上皮细胞(RTEC)损伤中的表达和作用.方法 以体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞株(NRK-52E)为对象,NRK-52E细胞置于50 mL·L-1二氧化碳( CO2),37℃培养箱中孵育至80％,传代后随机分为正常组和模型组.正常组细胞继续培养,模型组细胞置于真空罐中,负压吸引器抽尽残余空气,充以配好的缺氧气体(950 mL·L-1氮气和50 mL·L-1 CO2)密封建立缺氧性RTEC损伤模型,分别于造模第12、24、36小时采用实时荧光定量PCR检测PHB1、PHB2、转化生长因子-β1( TGF-β1) mRNA表达,Western blot检测PHB1、PHB2蛋白表达.结果 1.与正常组比较,模型组各时间点NRK-52E细胞的PHB1、PHB2蛋白及其mRNA表达均降低(Pa＜0.05),缺氧时间越长,表达量越低；NRK-52E细胞的TGF-β1 mRNA表达均增高(Pa＜0.05),缺氧时间越长,表达量越高.2.相关性分析:模型组NRK-52E细胞的PHB1、PHB2 mRNA 表达与TGF-β1 mRNA表达均呈负相关(r=-0.97、-0.99,Pa＜0.05).结论 缺氧所致NRK-52E细胞的PHB1、PHB2蛋白及mRNA表达均降低,缺氧时间越长,表达量越低,NRK-52E细胞损伤越重.PHB1、PHB2可能参与RTEC损伤的发生发展.
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尿中肾损伤标志物检测在儿科疾病诊断中的应用价值
[目的]结合临床实践经验,探讨尿中肾损伤标志物检测在儿科疾病诊断中的应用价值.[方法]采用对照研究,被检儿童均留取新鲜尿液(除晨尿)10 ml,-20℃保存待检.试剂、标准品、质控品由上海太阳生物技术公司提供.离心后标本用ELISA法测定IgG、RBP、β2-MG、m-ALB,在酶标仪492 nm处读OD值计算结果,并采用比色法测NAG、721分光光度计405 nm处比色并计算结果.对比分析两组的检测结果,分析尿中肾损伤标志物检测在儿科疾病诊断中的应用价值.[结果]肾病组尿中标志物水平均显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P < 0.05),肾病组各肾损伤标志物测定水平较高,联合应用100%阳性,而正常对照组仅有5.00%为阳性(主要为IgG水平较高,考虑主要与其出现在非选择性蛋白尿有关),两组比较差异有统计学意义(x2-21.93,P<0.05).[结论]对于多种原因造成的肾脏损伤,可以检测尿中IgG、RBP、β2-MG、m-ALB、NAG水平,不仅比血中BUN、Cr等肾功能指标敏感,而且实验标本留取简便,有助于临床早期发现肾损伤,积极采取合理用药并判断预后.
