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KDEL修饰的HSV-2CD8+T细胞表位促进CTL效应的研究
目的:研究赖氨酸-天冬氨酸-谷氨酸-亮氨酸(Lys-Asp-Glu-Leu,KDEL)修饰的2型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 2,HSV-2)CD8+T细胞表位促进细胞毒T淋巴细胞(cytotoxicity T lymphocyte,CTL)效应.方法:将雄性C57BL/6小鼠随机分为5组,每组5只,用各抗原肽免疫C57BL/6小鼠,采用3H-TdR掺入法检测淋巴细胞增殖反应、标准4 h51Cr释放试验检测CD8+T细胞特异性CTL效应,观察HSV-2CD8+T细胞表位(SSIEFARL,S1)、KDEL修饰的HSV-2CD8+T细胞表位(SSIEFARL-KDEL,S1-KDEL)、4拷贝串联的CTL表位[(SSIEFARL)4,S4]及KDEL修饰的串联CTL表位[(SSIEFARL)4-KDEL,S4-KDEL]的特异性细胞免疫应答.结果:3H-TdR掺入试验中,S4组和S4-KDEL组cpm值显著高于对照组和S1组、S1-KDEL组(P＜0.05);S4-KDEL组的cpm值显著高于S4组(P＜0.05);S1组和S1-KDEL组与对照组比较,差异无显著性(P＞0.05);S1组与S1-KDEL组比较,cmp值亦无显著性差异(P＞0.05).以S1致敏的EL4细胞为靶细胞的杀伤实验中,S4和S4-KDEL组诱导的CTL活性明显高于对照组、S1组及S1-KDEL组(P＜0.05);S4-KDEL组诱导的CTL活性明显高于S4组(P＜0.05),S1组和S1-KDEL组与对照组比较,差异无显著性(P＞0.05);S1组与S1-KDEL组比较,差异亦无显著性(P＞0.05);以EL4细胞为靶细胞的实验中,实验组的杀伤率均在10%以下,与对照组比较,差异无显著性(P＞0.05).结论:KDEL修饰的串联HSV-2CD8+T细胞表位能有效促进CTL效应.
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HBcAg18-27V/I变异体与严重乙型肝炎活动的关系
目的 探讨人白细胞抗原(HLA)-A2限制性细胞毒T淋巴细胞(CTL)表位HBcAg18-27V/I变异体与乙型肝炎活动的关系.方法 收集77例严重乙型肝炎活动(SHB)患者和88例慢性乙型肝炎(CHB)患者的血标本,提取其中的HBV DNA,PCR扩增测序HBcAg18-27表位编码区、HBV基因型并鉴定HLA-A2.随访SHB患者至少3个月,在随访时间点留取血标本,提取其中的HBV DNA,PCR扩增测序HBcAg18-27表位编码区,并收集单个核细胞(PBMC)行五聚体染色检测HBcAg18-27表位特异性CD8+记忆T细胞的频数.结果 SHB组HBcAg18-27V的检出率为23.4％ (18/77)、CHB组为4.5％ (4/88),两组相比,P＜0.01.随访存活的10例HBcAg18-27V SHB患者(1例PCR扩展阴性),其中4例HLA-A2阳性患者HBcAg18-27V变异为HBcAg18-27I,而5例HLA-A2阴性者随访后仍检测到HBcAg18-27V.HBcAg18-27V特异性CD8+记忆T细胞的频数高于HBcAg18-27I者.结论 在HLA-A2阳性的SHB患者中,发生HBcAg18-27V向HBcAg18-27I表位漂移是HBcAg18-27V诱导的CTL免疫反应的结果；而CTL免疫反应在清除HBcAg18-27V病毒的同时,也参与了HBV相关SHB活动的发生.
关键词： 乙型肝炎病毒 乙型肝炎 细胞毒T淋巴细胞表位 细胞毒T淋巴细胞免疫反应 免疫逃逸 -
利用重叠PCR实现乙肝表面抗原CTL表位的替换
目的 以磷酸酰肌醇蛋白聚糖-3蛋白(glypican-3,GPC3)的CTL表位EYILSLEEL替换HBsAg中内源性CTL表位LLD,构建用于预防和治疗乙肝的DNA疫苗.方法 以重组表面抗原基因pcHBsAg质粒为模板,应用重延伸PCR扩增出含EYILSLEEL表位的HBsAg基因HBsAg/GPC3,将其插入pBSSK+载体中,构建出pBSSK/GPC3载体.利用DNA重组技术将其定向插入真核表达载体pcDNA3.1+中,将真核表达载体经PCR、酶切和测序鉴定,构建表达CTL表位EYILSLEEL的DNA疫苗.结果 酶切和测序的结果显示序列无错配,获得了完整表达EYILSLEEL表位的真核质粒pcDNA3-HBsAg/GPC3.结论 成功将EYILSLEEL表位替换HBsAg的内源性CTL表位,构建了pcDNA3-HBsAg/GPC3真核表达质粒.
