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pQE-30文献资料
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人精子表面蛋白P34H重组表达载体的构建及诱导表达
目的:获得纯化的人精子表面蛋白P34H用于基础和临床研究.方法:在克隆到P34H基因编码区全长的基础上,将P34H基因亚克隆至原核表达载体pQE-30中,构建重组表达载体pQE-30/P34H.将pQE-30/P34H转化至大肠埃希菌后,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过Ni-NTA树脂进行亲和层析纯化上清中可溶性形式的重组蛋白P34H.对表达纯化重组蛋白的质粒进行DNA测序,并对重组蛋白P34H行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,鉴定其是否为所需目的蛋白.结果:经PCR和双酶切鉴定,重组表达载体pQE-30/P34H为正确克隆.SDS-PAGE和DNA测序证实,所获的重组蛋白确系所需目的蛋白.结论:用上述原核表达的方法可获得纯化的人精子表面蛋白P34H.
