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精浆游离DNA研究进展
游离DNA又称为胞外DNA,广泛分布于人血浆、尿液、脑脊液、支气管肺泡灌洗液、羊水和精浆等体液中.目前,已被广泛研究并成为多种疾病无创诊断和研究的新分子标记物.近年来,精浆游离DNA(cfsDNA)在其浓度、分子量大小、来源及存在形式等一般特征和临床应用研究方面取得了一定进展,并在男性特发性不育病因诊断、研究及睾丸生殖细胞肿瘤、前列腺癌的早期诊断、疗效监测和预后评估等方面展示出良好的应用前景.本文概述游离DNA一般特征和生物学功能,并结合cfsDNA的研究现状及应用前景作一综述.
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甲基化DNA免疫沉淀-荧光实时定量PCR检测人精浆游离DNA睾丸和附睾特异性甲基化启动子
目的:建立检测精浆游离DNA(cfsDNA)启动子甲基化水平的甲基化DNA免疫沉淀-荧光实时定量PCR (MeDIP-qPCR)方法. 方法:提取精液参数正常(6例)和输精管结扎(6例)男性的cfsDNA,将两组不同个体的cfsDNA分别进行混合,超声处理后形成DNA片段,通过MeDIP分离甲基化DNA片段,然后用qPCR方法检测启动子甲基化水平. 结果:精液参数正常组的PRAME、PEG10、MORC1、GML、HOXA5、DNMT3L、SNURF、MSH4、DAZ1和CLPB启动子甲基化水平分别为14.93％、2.64％、0.69％、2.66％、17.50％、21.10％、5.98％、2.28％、13.50％和3.86％,明显低于输精管结扎组的121.25％、73.62％、16.25％、42.90％、76.74％、112.40％、59.79％、25.85％、91.90％和64.53％.其中,PRAME、MORC1、GML、HOXA5、DNMT3L、SNURF、MSH4和DAZ1等8个启动子MeDIP-qPCR的检测结果与启动子甲基化芯片结果一致. 结论:通过MeDIP-qPCR方法可以定量检测到cfsDNA中的特异性启动子甲基化,为确定cfsDNA中睾丸和附睾特异性甲基化启动子提供了有效途径.
