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唯支持细胞综合征患者睾丸组织Boule基因5’调控序列甲基化分析
目的:探讨唯支持细胞综合征(ScoS)患者睾丸组织中Boule基因5’调控序列甲基化状态. 方法:收集梗阻性无精子症患者(12例)和SCOS无精子患者(15例)睾丸组织穿刺标本,门诊检查排除精索静脉曲张、隐睾、感染等疾病.试剂盒法提取患者睾丸组织基因组DNA,利用生物信息学方法分析Boule基因5’调控序列的序列特征,采用亚硫酸氢钠测序法检测睾丸组织中Boule基因甲基化状态. 结果:Boule基因5’调控区存在一个CpG岛,SCOS患者Boule基因的甲基化水平(61.4％)显著高于梗阻性无精子症患者(21.7％)(P＜0.01),共14个CpG位点甲基化有显著性差异,分别为-58 bp、-50 bp、-48 bp、-38 bp、-28 bp、-24 bp、-20 bp、-15 bp、-1 bp、+5 bp、+8 bp、+15 bp、+29 bp和+58 bp. 结论:SCOS患者Boule基因的甲基化水平显著高于梗阻性无精子症患者,推测这种甲基化变化可能与精子发生障碍有关.
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改进的亚硫酸氢钠测序法检测HepG2 RASSF1A基因CpG岛甲基化状态
目的改进亚硫酸氢钠测序法,并检验改进后方法在甲基化检测中的可行性.方法提取人肝癌细胞株HepG2基因组DNA,亚硫酸氢钠化学修饰,针对修饰后Ras相关家族1A基因(RASSF1A)启动子序列设计特异引物并结合沉降PCR扩增,T-A载体克隆、测序.结果 HepG2细胞RASSF1A基因启动子CpG岛的16个CpG位点均被甲基化.结论改进后亚硫酸氢钠测序法能明显减少非特异性扩增,提高PCR效率,更适于基因甲基化状态的检测.
关键词： 亚硫酸氢钠测序法 甲基化 聚合酶链反应 Ras相关家族1A基因 -
乳腺癌组织中Maspin蛋白表达与maspin基因启动子甲基化关系的研究
背量与目的:探讨乳腺癌与maspin基因失活之间的关系.材料与方法:采用免疫组织化学方法检测30例乳腺癌患者癌组织、癌近旁组织和癌远旁组织中Maspin蛋白的表达情况,用亚硫酸氢钠测序法检测乳腺癌组织maspin启动子CpG岛的甲基化情况.结果:乳腺癌组织中的Maspin蛋白表达明显低于癌近旁组织(P<0.05)和癌远旁组织(P<0.01),乳腺癌组织maspin基因启动子CpG岛甲基化率为98.72%.结论:乳腺癌的发生与nmspin基因失活关系密切,启动子异常甲基化可能是maspin基因在乳腺癌中失活的重要途径.
