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甲基化荧光PCR检测母血中游离胎儿maspln因的研究
目的:探讨Taqman探针与甲基化特异性PCR(MSP)技术结合测定孕妇血浆中甲基化maspin(M- maspin)基因和非甲基化maspin (U -maspin)基因的可行性,并分析微量U-maspin的临床意义.方法:选择正常早、中、晚期妊娠妇女各30例为研究对象,健康未妊娠女性30例为对照,提取其血浆游离DNA.通过含目的基因质粒标准品绘制标准曲线,并应用甲基化荧光PCR方法检测各组血浆标本亚硫酸氢盐修饰后M-maspin基因和U-maspin基因的含量,分别代表母源性游离DNA和胎源性游离DNA水平.结果:除3例早期妊娠孕妇外,其余孕妇血浆中均检出了U maspin基因,平均浓度在早期妊娠组为57拷贝/ml,中期妊娠组为121拷贝/ml,晚期妊娠组为561拷贝/ml;占母源性M -maspin基因的比例分别为1.88％、3.21％、9.58％.结论:母血中U- naspin基因具有游离胎儿DNA的动力学特点,可能成为一种通用胎儿标记物,应用甲基化荧光PCR技术检测孕妇血浆中微量U-maspin基因方法准确、可行.
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南蛇藤提取物对高表达maspin的人胃癌MGC-803细胞凋亡的影响
目的:利用高表达抑癌基因maspin的人胃癌MGC-803细胞探讨南蛇藤提取物对其凋亡的影响.方法:以人胃癌MGC-803细胞为研究对象,不同质量浓度20,40,80,160,320 mg·L-1南蛇藤提取物作用于MGC-803细胞24,48 h后,MTT法检测南蛇藤提取物对高表达maspin的人胃癌MGC-803细胞增殖的影响;以不同质量浓度COE组(0,20,40,80 mg·L-1)及32 mg·L-1的5-FU阳性对照处理24 h后,TUNEL法检测南蛇藤提取物对细胞凋亡的影响,Western blot检测对maspin,Bcl-2,Bcl-2L12及Bax蛋白表达的影响.结果:南蛇藤提取物(20,40,80,160,320 mg·L-1)能明显抑制高表达maspin的人胃癌MGC-803细胞的增殖,呈现时间及浓度依赖性;与空白组比较,不同质量浓度的南蛇藤提取物(20,40,80 mg·L-1)作用24 h后,镜下显示,随着药物浓度升高,细胞数目减少,形态变圆,胞浆浓缩,出现凋亡小体,TUNEL结果表明南蛇藤提取物(20,40,80 mg·L-1)能促进细胞凋亡,Western blot结果显示南蛇藤提取物(20,40,80,160 mg·L-1)可呈浓度依赖性地增加抑癌基因maspin蛋白的表达,降低Bcl-2,Bcl-2L12的表达,均具有明显的统计学差异(P＜0.05,P＜0.01).结论:南蛇藤提取物能够抑制高表达maspin的人胃癌MGC-803细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与南蛇藤提取物促进抑癌基因maspin的表达以及抑制Bcl-2,Bcl-2L12的表达有关.
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乳腺癌组织中maspin和BCSG1蛋白表达及其意义
目的:探讨maspin和BCSG1蛋白在乳腺癌组织中的表达及其临床意义.方法:应用流式细胞术对94例乳腺癌组织中的maspin和BCSG1蛋白的表达情况进行定量检测,结合临床及病理形态学资料采用t检验、χ2检验、方差分析及直线相关分析讨论maspin和BCSG1蛋白表达的意义.结果:maspin和BCSG1蛋白表达在复发组比无复发组明显增高,且差异有统计学意义(t=-2.86,P=0.005 5;t=-2.33,P=0.023);淋巴结转移组比无转移组明显增高,且差异有统计学意义(t=2.91,P=0.004;t=3.42,P=0.001);直线相关分析显示,maspin和BCSG1两者密切相关,r=0.553,P=0.000.在BCSG1的FI值≥4的病例中复发转移病例明显增多(χ2=6.86,P=0.009),但两者均与患者年龄(t=1.129,P=0.262;t=0.808,P=0.421)、肿瘤大小(t=0.078,P=0.938;t=0.002,P=0.998)、临床分期(Fmaspin=0.658,FBCSG1=0.463;Ⅰ和Ⅱ此较:P=0.537,P=0.426;Ⅱ和Ⅲ比较:P=0.458,P=0.371;Ⅰ和Ⅲ比较:P=0.725,P=0.537)无关.结论:BCSG1蛋白可能作为预测乳腺癌预后的参考指标,而maspin蛋白预测乳腺癌预后的价值尚需进一步证实.
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鼻咽癌组织Maspin和GRP78表达与放疗敏感相关性研究
目的 研究鼻咽癌组织中Maspin和GRP78的表达,探讨其在放射治疗鼻咽癌的意义.方法 选取湖南省肿瘤医院2006-01-13-2006-11-26第一次入院接受放射治疗的60例鼻咽癌患者,运用原位杂交方法检测Maspin mRNA和GRP78 mRNA的表达.结果 放疗敏感及放疗抗拒鼻咽癌组织中,Maspin mRNA中度和强阳性表达率分别为70.00％和42.50％,x2=4.038,P=0.044 5,GRP78 mRNA中度和强阳性表达率分别为20.00％和47.50％,x2=4.047,P=0.044 3.在放疗抗拒鼻咽癌组织中,Maspin mRNA中度及强阳性表达率与T分期存在关联性,在T3和T4期中表达率为63.16％,T1和T2期中表达率为23.81％,x2=6.320,P=0.011 9;在有、无远处转移中的表达率分别为72.73％和31.03％,x2=4.095,P=0.043 0;GRP78mRNA中度及强阳性表达率与TNM分期也存在关联性,Ⅲ和Ⅳ期GRP78 mRNA中度及强阳性表达率为58.62％,Ⅰ和Ⅱ期表达率为18.18％,x2=5.230,P=0.022 2,与T分期也存在关联性,T3和T4期表达率为68.42％,T1和T2期表达率为28.57％,x2=6.352,P=0.011 7,在有、无远处转移中的表达率分别为72.73％和37.93％,x2=3.872,P=0.049 1.结论 Maspin参与放疗抗拒鼻咽癌的发展,GRP78降低鼻咽癌的放疗敏感性.
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5-Aza-CdR对乳腺癌细胞增殖及Maspin 基因表达的影响
目的 研究5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对乳腺癌MDA-MB-435S细胞增殖及抑癌基因Maspin表达的影响.方法 用特异性甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR处理乳腺癌细胞株MDA-MB-435S 8 d 后,采用四唑盐(MTT)比色法观察细胞在药物处理前后的生长活性,应用流式细胞仪进行细胞周期的检测,RT-PCR检测细胞处理前后Maspin mRNA的表达.结果 5 μmol/L 5-Aza-CdR处理乳腺癌细胞株MDA-MB-435S 8 d后,与对照组比较能明显抑制肿瘤细胞的生长.流式细胞仪检测发现5 μmol/L 5-Aza-CdR作用72 h 后可导致MDA-MB-435S细胞G2/M期阻滞,减少进入有丝分裂期的细胞百分比.RT-PCR显示Maspin mRNA 在5μmol/L 5-Aza-CdR作用72 h后重新表达.结论 在人乳腺癌MDA-MB-435S细胞中,Maspin基因可能因高甲基化而导致转录失活,经特异性甲基转移酶抑制剂5-Aza.CdR处理可使Maspin基因重新表达,后者能导致该肿瘤细胞G2/M期阻滞,并抑制细胞生长.
关键词： maspin基因 甲基化 5-氮-2'-脱氧胞苷 乳腺癌 -
姜黄素上调前列腺癌细胞LNCaP中maspin基因的表达
目的 研究姜黄素对前列腺癌细胞LNCaP凋亡的影响和对maspin基因表达的调控作用.方法 利用不同浓度的姜黄素处理前列腺癌细胞LNCaP,MTT法和DNA 电泳检测不同时相LNCaP细胞的活性和凋亡情况,RT-PCR和Western blotting检测转录水平和翻译水平maspin基因的表达情况.将包含maspin 5′侧启动子区847 bp(-764～+83)DNA的荧光素酶表达载体pGL3-maspin瞬时转染LNCaP,姜黄素作用细胞48 h后,应用荧光素酶测定系统检测maspin启动子的表达活性作用.结果 姜黄素抑制LNCaP细胞的生长活性,诱导LNCaP细胞的凋亡,增强LNCaP细胞中maspin基因的表达.结论 姜黄素增强LNCaP细胞中maspin基因的表达是通过促进启动子的转录活性起作用的.
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maspin、Mn-SOD表达与鼻咽癌组织放疗敏感相关性研究
目的 研究maspin及Mn-SOD在放射治疗鼻咽癌中的表达,探讨其在放射治疗鼻咽癌中的意义.方法 取60例2006年第1次入院放射治疗鼻咽癌,运用原位杂交方法检测放射治疗鼻咽癌中maspin及Mn-SOD mRNA的表达.结果 在放疗敏感及放疗抗拒鼻咽癌中,maspin mRNA中度及强阳性表达率分别为70.00％和42.50％,Mn-SOD mRNA中度及强阳性表达率分别为55.00％和40.00％,差异有统计学意义.在放疗抗拒鼻咽癌中,maspin及Mn-SOD mRNA中度及强阳性表达率均与T分期呈正相关,T3和T4期中表达率分别为63.16％和63.16％,T1和T2期中表达率分别为23.81％和19.05％.在有、无远处转移中,maspin mRNA中度及强阳性的表达率分别为72.73％和31.03％,Mn-SOD mRNA中度及强阳性表达率分别为81.82％和24.14％,差异有统计学意义.结论 maspin、Mn-SOD参与了放射抗拒鼻咽癌的发展.
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MASPIN基因在妊娠滋养细胞肿瘤中的表达及意义
目的:探讨MASPIN基因在妊娠滋养细胞肿瘤中的表达,了解MASPIN基因在妊娠滋养细胞肿瘤发生、发展中的作用.方法:采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法检测10例妊娠滋养细胞肿瘤、30例葡萄胎、20例正常妊娠早期绒毛(对照组)各标本中MASPIN的表达.结果:妊娠滋养细胞肿瘤中MASPIN阳性表达率(10%,1/10)明显低于对照组(95%,19/20)(P＜0.05).葡萄胎组中MASPIN阳性表达率(60%,18/30)明显低于对照组(95%,19/20)(P＜0.05).妊娠滋养细胞肿瘤中MASPIN阳性表达率明显低于葡萄胎组(P＜0.05).结论:MASPIN的表达下调与妊娠滋养细胞疾病的发生、发展有关,可能是妊娠滋养细胞疾病发病的重要机制之一.
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maspin CD44V6在非小细胞肺癌中的表达及意义
目的:探讨maspin及CD44V6在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及临床意义,分析maspin与CD44V6的表达有无相关.方法:应用免疫组织化学PictureTM通用型二步法检测94例NSCLC组织、54例正常支气管粘膜组织、28例肺良性病变中maspin和CD44V6的表达情况.结果:maspin在正常支气管粘膜组织及肺良性病变中的阳性表达率分别为100%和89.28%,在肺癌组织中的阳性表达率为54.26%,正常支气管粘膜组织与肺癌之间、肺良性病变与肺癌之间的阳性表达率差异有显著意义(P＜0.05),maspin阳性表达率与NSCLC临床分期、淋巴结转移成负相关,与病理类型、组织分化程度无关.CD44V6在NSCLC中的阳性表达率68.09%,与临床分期、淋巴结转移成正相关,与病理类型、组织分化程度无关;而在正常支气管粘膜组织及肺良性病变中无阳性表达.maspin基因表达与CD44V6呈负相关(r=-0.213,P＜0.01).结论:maspin和CD44V6在肺癌的发生、发展、转移过程中发挥调控作用,可作为判断肺癌预后和转移的重要生物学指标.
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Maspin在肿瘤抑制中的作用及机制
Maspin基因是1994年Zon等[1]用消减杂交技术对正常乳腺组织和乳腺癌组织进行比较时发现的,证实其为新的丝氨酸蛋白酶抑制剂基因.近年来,越来越多的证据表明,Maspin基因在肿瘤的发生、进展中起到重要的作用.Maspin基因具有调节细胞浸润、增加细胞的黏附力、降低细胞的运动能力的功能,而且能够抑制肿瘤细胞的生长,诱导其凋亡,抑制肿瘤新生血管的生成等,是具有抑癌基因性质的丝氨酸蛋白酶抑制剂基因.
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未甲基化Maspin基因在孕妇分娩前后含量变化探讨
本研究旨在检测在孕妇分娩前后未甲基化maspin基因的含量变化及表达水平,为寻找一种更加安全、可靠、简便、快捷、易于被患者接受的非创伤性产前诊断创造条件.报告如下.
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未甲基化Maspin基因在孕妇分娩前后含量变化探讨
本研究旨在检测在孕妇分娩前后未甲基化maspin基因的含量变化及表达水平,为寻找一种更加安全、可靠、简便、快捷、易于被患者接受的非创伤性产前诊断创造条件.报告如下.
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Maspin基因甲基化对口腔黏膜鳞癌细胞的调控作用
目的:分析口腔黏膜鳞癌细胞增殖过程中Maspin基因甲基化的调控作用机制,为相关研究及临床治疗提供借鉴.方法:鳞状细胞癌HIOEC-B(a)P细胞系随机分为4组:5-氮-2-脱氧胞苷+曲古抑菌素A(ADC+TSA)阴性组、低(0.1 μmol/L+0.05μmol/L)、中(1μ,mol/L+0.5 μmol/L)和高剂量组(10 μmol/L+5 μ,mol/L).以正常口腔黏膜上皮细胞作为对照组.实时定量PCR检测各组细胞Maspin基因的甲基化程度,MTT法检测各组细胞的增殖情况,4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色检测细胞凋亡.采用SPSS20.0软件包对数据进行单因素方差分析.结果:与对照组相比,癌细胞的Maspin基因甲基化程度显著增强(P＜0.01),与阴性组相比,中剂量和高剂量组Maspin基因甲基化程度显著减弱(P＜0.05,P＜0.01),低、中、高剂量组的细胞增殖抑制率显著高于阴性组(P＜0.05,P＜0.01).随着药物剂量的提高,细胞凋亡程度逐渐增加(P＜0.05).结论:Maspin基因甲基化可能参与口腔黏膜鳞癌细胞的增殖过程.
关键词： maspin基因 甲基化 5-氮-2-脱氧胞苷 曲古抑菌素A -
Maspin基因在乳腺癌骨髓和外周血微小转移检测中的应用价值
目的:研究Maspin基因在乳腺癌患者骨髓和外周血微小转移检测中的应用价值以及骨髓和外周血Maspin mRNA表达与乳腺癌临床病理因素之间的相关性.方法:采用巢式逆转录-聚合酶链反应检测10例良性乳腺疾病患者和41例乳腺癌患者骨髓及外周血中Maspin mRNA的表达.结果:在10例对照组骨髓和外周血中均未检测出Maspin mRNA,而在乳腺癌患者骨髓和外周血中分别有15例(36.6%)和16例(39%)检测到:Maspin mRNA.骨髓和外周血中Maspin mRNA检测结果的符合率为87.8%,检测结果有相关性(X2=22.563,P=0.000.R=0.742).乳腺癌患者骨髓和外周血中Maspin mRNA表达率随病理分期升高、淋巴结转移、临床分期进展而升高,但均无显著性差异.如将患者按复发风险分组.高危组患者骨髓和外周血中MaspinmRNA表达率明显升高,但仅在骨髓中显示有显著性差异(X2=6.621,P=0.037),而在外周血中无显著性差异(X2=5.904,P=0.052).结论:Maspin基因用于乳腺癌患者骨髓和外周血微小转移的检测具有很高的特异性,乳腺癌患者骨髓和外周血中Maspin mRNA表达可能与高危复发风险相关.
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Maspin基因在不同转移习性的人鼻咽癌细胞株中表达水平的研究
目的:在mRNA和蛋白水平检测5种不同转移习性的人鼻咽癌细胞株中Maspin基因表达的差异,探讨Maspin基因与已知转移习性人鼻咽癌细胞株之间的相关性,为鼻咽癌发生转移的可能机制及临床预测转移风险提供理论基础.方法:体外培养SUNE-1-5-8F、SUNE-1、CNE-2Z、CNE-1、SUNE-1-6-10B 5株不同转移习性的人鼻咽癌细胞株.用RT-PCR及Western blot 2种方法在mRNA和蛋白水平检测5种人鼻咽癌细胞株中Maspin基因表达情况.结果:Maspin基因在SUNE-1-5-8F、SUNE-1、CNE-1及SUNE-1-6-10B细胞株均有不同程度表达,差异无统计学意义(P>0.05),在CNE-2Z细胞株中不表达,且在mRNA和蛋白水平Maspin基因表达具有一致性;Maspin基因在不同转移习性人鼻咽癌细胞株中mRNA和蛋白表达量总体存在差异(P<0.05),但表达量不随鼻咽癌细胞株转移习性增高而降低(P>0.05).结论:Maspin基因在不同转移习性的人鼻咽癌细胞株中mRNA和蛋白表达量不同;Maspin基因可能与人鼻咽癌细胞株的转移潜能无相关性.
关键词： 鼻咽肿瘤 转移抑制基因 maspin基因 RT-PCR Westernblot -
Maspin基因在妇科恶性肿瘤中的研究进展
Maspin是一种肿瘤抑制基因,编码产物属丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族,卵清蛋白亚族.Maspin具有抑制肿瘤细胞运动、侵袭、转移和肿瘤新生血管生成等作用,在抑制肿瘤生长、转移中发挥重要功能.此文就maspin与妇科恶性肿瘤的相关研究进展作一综述.
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Maspin在非小细胞肺癌中的表达及与p53的相关性
目的 探讨maspin在非小细胞肺癌中的表达及其与p53的关系.方法 对99例非小细胞肺癌组织maspin及p53蛋白的表达情况通过免疫组化法进行检测,分析其临床病理意义及相关性.结果 maspin蛋白表达与肿瘤病理类型、肿瘤分化程度、淋巴结状态及临床分期相关(P<0.05).而p53蛋白的表达则与临床分期、淋巴结状态相关(P<0.05).maspin与p53蛋白的表达呈负相关(γ=-0.180),但无统计学意义(P=0.075).结论 Maspin及p53蛋白的表达在非小细胞肺癌的发生、发展过程中起重要作用,但本研究未发现两者具有统计学意义的相关性.
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Maspin基因甲基化水平检测诊断爱德华兹综合征的价值分析
目的:探讨母体血浆中Maspin基因作为DNA遗传标记物,筛查胎儿爱德华兹综合症的临床价值.方法:收集孕早、 中、 晚期孕妇及非孕妇女血浆各15名,提取游离DNA,以甲基化特异性PCR检测各组血浆游离DNA中Maspin基因的甲基化水平;收集引产术胎盘组织及孕妇外周血单核细胞各15例,检测Maspin基因甲基化水平;收集确诊爱德华兹综合症胎儿的孕妇血浆34例及正常孕妇外周血浆45例,检测并对比Maspin甲基化水平.结果:与未孕组相比,孕早期、 孕中期、 孕晚期组MASPIN基因甲基化水平显著增高,差异具有显著统计学意义(P<0.01).在正常产妇中,胎盘组织中MASPIN甲基化水平(15/15)显著高于血单核细胞中MASPIN甲基化水平(0/15)(P<0.01).与正常产妇相比,爱德华兹综合征胎儿母体血浆中的MASPIN基因甲基化率只有14.71％(5/34),而正常胎儿的孕妇血浆的甲基化率达到了88.9％,差异具有显著统计学意义(P<0.01).结论Maspin基因甲基化水平在爱德华兹综合征胎儿母体外周血中的差异,在非创伤性产前诊断爱德华兹综合征中有一定临床价值,能够为爱德华兹综合征的无创产前诊断提供新方向.
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Maspin表达在结直肠肿瘤中的研究进展
Maspin是乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine protease inhibitor,serpin),相对分子质量为42×103蛋白,是serpin超家族成员maspin基因serpin 5,位于染色体18q21.3～q23.maspin基因是用消减杂交(subtractive hybridization)技术对正常乳腺组织和乳腺癌组织进行比较时发现的,证实其为serpin的成员,命名为maspin (mammary-serpin),与血浆纤维蛋白原激活抑制剂1和2及α1-抗胰蛋白酶抑制剂一样,都是丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine protease inhibitor,serpin)超家族的成员[1].maspin初在正常乳腺和前列腺组织中被发现,其在肿瘤组织中表达减少或缺失,maspin显示出肿瘤抑制作用,其表达与肿瘤细胞的恶性程度及血管化有关.Maspin在不同的组织器官及不同的亚细胞结构表达不同,在乳腺[2]、胃[3]、前列腺[4]、黑色素瘤[5]中呈现表达下调,而在结直肠、胆囊、甲状腺、胰腺表达上调[5-7].
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Maspin基因与胃癌侵袭转移
Maspin基因是从乳腺上皮细胞中分离出的抑癌基因,属于丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族的成员.Maspin基因在胃癌侵袭和转移过程中发挥重要作用.研究表明,Maspin基因主要通过诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤血管生成、甲基化修饰作用以及通过促进同质黏附、抑制异质黏附等方式来抑制胃癌的发生、发展和转移.
