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鼻咽癌组织Maspin和GRP78表达与放疗敏感相关性研究
目的 研究鼻咽癌组织中Maspin和GRP78的表达,探讨其在放射治疗鼻咽癌的意义.方法 选取湖南省肿瘤医院2006-01-13-2006-11-26第一次入院接受放射治疗的60例鼻咽癌患者,运用原位杂交方法检测Maspin mRNA和GRP78 mRNA的表达.结果 放疗敏感及放疗抗拒鼻咽癌组织中,Maspin mRNA中度和强阳性表达率分别为70.00％和42.50％,x2=4.038,P=0.044 5,GRP78 mRNA中度和强阳性表达率分别为20.00％和47.50％,x2=4.047,P=0.044 3.在放疗抗拒鼻咽癌组织中,Maspin mRNA中度及强阳性表达率与T分期存在关联性,在T3和T4期中表达率为63.16％,T1和T2期中表达率为23.81％,x2=6.320,P=0.011 9;在有、无远处转移中的表达率分别为72.73％和31.03％,x2=4.095,P=0.043 0;GRP78mRNA中度及强阳性表达率与TNM分期也存在关联性,Ⅲ和Ⅳ期GRP78 mRNA中度及强阳性表达率为58.62％,Ⅰ和Ⅱ期表达率为18.18％,x2=5.230,P=0.022 2,与T分期也存在关联性,T3和T4期表达率为68.42％,T1和T2期表达率为28.57％,x2=6.352,P=0.011 7,在有、无远处转移中的表达率分别为72.73％和37.93％,x2=3.872,P=0.049 1.结论 Maspin参与放疗抗拒鼻咽癌的发展,GRP78降低鼻咽癌的放疗敏感性.
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Chop及Grp78基因在先天性脊柱裂大鼠胚胎12天神经管中的异常表达
目的 探讨Chop及Grp78基因在先天性脊柱裂大鼠胚胎12 d神经管及神经上皮干细胞中的表达情况.方法 取畸形大鼠12d胚胎神经管组织,荧光实时定量PCR考察Chop及Grp78基因表达.另取12 d正常大鼠胚胎,分离消化神经管行神经上皮干细胞培养.荧光实时定量PCR考察Chop及Grp78基因表达.结果 先天性脊柱裂大鼠胚胎12 d神经管内Chop基因及Grp78基因表达异常增高.神经上皮干细胞分化为神经元后Chop及Grp78基因的表达上调.结论 Chop及Grp78基因在先天性脊柱裂大鼠胚胎12d神经管中表达异常增高,二者在神经上皮干细胞分化为神经元后表达上调,可能与内质网应激相关的凋亡有关.神经上皮干细胞培养培养体系稳定、高效,可以为胚胎早期发育提供实验模型.
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葡萄糖调节蛋白78的表达、纯化及ATP酶活性实验
目的 构建GRP78原核表达重组质粒pW28-GRP78,在大肠杆菌BL21中表达并纯化获得GRP78蛋白质,检测其ATP酶活性.方法 通过NCBI数据库得到GRP78基因序列,PCR扩增获得GRP78基因片段,并插入到带有His标签的载体pW28中,构建重组质粒pW28-GRP78,然后转入大肠杆菌BL21中进行表达,利用镍离子亲和层析纯化目的蛋白.对GRP78进行ATP酶活性检测,并检测GRP78蛋白浓度、反应温度对GRP78蛋白ATP酶活性的影响.结果 GRP78蛋白在大肠杆菌BL21中获得大量上清表达,并成功纯化了目的蛋白;ATP酶活性检测实验发现GRP78蛋白具有ATP酶活性,其酶活性与GRP78蛋白浓度、反应温度有关.结论 GRP78蛋白具有ATP酶活性,并且与蛋白浓度、反应温度有关.
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Grp78基因过表达慢病毒载体构建和包装及鉴定
目的：探讨Grp78基因过表达慢病毒载体的构建、包装和滴度检测。方法采用慢病毒载体，运用基因工程技术，获取目的基因片段并构建重组质粒，然后制备感受态细胞并转化，将重组质粒导入感受态细胞；用PCR技术鉴定阳性克隆和进行DNA序列分析及对慢病毒包装和滴度检测。结果阳性克隆测序比对结果说明测通。熔解曲线中既没出现杂峰也没出现主峰的异常增宽，表明实验中未出现污染、引物二聚体和非特异性扩增。结论Grp78基因过表达慢病毒载体构建和包装成功。
