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长链非编码RNA GAS5调节喉癌细胞生物学行为的实验研究
目的 探讨长链非编码RNA GAS5(lncRNA GAS5)对喉癌Hep2细胞增殖和凋亡的影响及可能机制.方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测喉癌和癌旁正常组织中GAS5的表达,分析其表达与喉癌临床病理特征的关系. Hep2细胞中分别转染pcDNA3. 1?GAS5或siGAS5,另分别转染pcDNA3. 1?NC或siNC作对照. MTT法检测转染后Hep2细胞增殖活性,流式细胞术检测Hep2细胞周期和凋亡,QPCR法和Western blotting法检测E2F1、BTF3 mRNA和蛋白的表达.结果 喉癌组织和癌旁正常组织中GAS5 表达水平分别为0. 56±0. 10和0. 98±0. 11,差异有统计学意义(P＜0. 05). GAS5表达与分化程度、TNM分期有关. pcDNA3. 1?GAS5组24、48 、72 、96 h Hep2细胞存活率明显低于pcDNA3. 1?NC组,差异有统计学意义(P＜0. 05);siGAS5组细胞存活率明显高于 siNC组,差异有统计学意义(P＜0. 05). pcDNA3. 1?GAS5 组细胞 G1期细胞比例为(68. 14±4. 33)%,高于pcDNA3. 1?NC组,差异有统计学意义(P＜0. 05). pcDNA3. 1?GAS组凋亡率高于pcDNA3. 1?NC组,差异有统计学意义(P＜0. 05). pcDNA3. 1?GAS5组细胞E2F1、BTF3 mRNA和蛋白的水平均低于pcDNA3. 1?NC组,差异具有统计学意义(P＜0. 05);siGAS5组细胞E2F1、BTF3 mRNA和蛋白的水平均高于siNC组,差异具有统计学意义( P＜0. 05).结论GAS5可负性调控E2F1和BTF3表达,从而参与调控喉癌细胞的增殖和凋亡.
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特异性小分子RNA沉默转录因子E2F-1表达对小鼠精原干细胞凋亡的影响
目的 观察小分子干扰RNA(siRNA)沉默转录因子E2F-1表达对小鼠精原干细胞(SSCs)凋亡的影响.方法 采用Percoll液密度梯度离心分离和流式细胞仪分选纯化SSCs进行体外培养,以脂质体法转染pSilencerk 1-E2F1至SSCs,并用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测E2F-1的表达水平,流式细胞仪检测siRNA干扰E2F-1表达后对SSCs凋亡的影响.结果 RT-qPCR结果实验组mRNA的2-△△Ct)值(0.32)明显低于未转染组(0.10)和阴性对照组(1.04),Westem blot显示实验组条带灰度低于未转染组和阴性对照组,流式细胞术检测显示实验组凋亡率(7.69％)低于未转染组(23.07％)和阴性对照组(24.19％),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 siRNA靶向干扰转录因子E2F-1能显著降低小鼠SSCs的凋亡率.
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转录因子E2F1调控小细胞肺癌凋亡机制的研究
目的：探讨转录因子E2F1对人小细胞肺癌细胞株H446的凋亡调节作用。方法：构建转录因子E2F1的重组质粒，经脂质体导入H446细胞，分别设置空白对照组、阴性对照组。采用适时定量PCR法和免疫印迹法（western-blot）检测转染前后细胞转录因子E2F1的mRNA与蛋白表达的变化，以及抗凋亡蛋白BCL-2的表达水平。同时采用流式细胞仪技术检测转染前后细胞凋亡率的变化。结果：成功建立E2F1干扰的小细胞肺癌细胞株，其E2F1蛋白表达较空白对照及未转染组明显降低。转染后的细胞株凋亡率较转染前及空白对照组明显下降（P ＜0．05）。转染后的细胞株抗凋亡蛋白Bcl-2较空白对照组及未转染组显著升高（P＜0．05）。结论：转录因子E2F1在小细胞肺癌细胞株H446中起促进凋亡的作用，有可能通过影响抗凋亡蛋白Bcl-2的表达参与调控细胞凋亡过程。
