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微小RNA-99a-5p靶向调控IGF1R表达及对肝癌HepG2细胞侵袭迁移的影响
目的 探讨微小RNA-99a-5p(miR-99a-5p)对肝癌细胞HepG2侵袭和迁移的影响及对胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)的靶向调控作用.方法 收集本院2014年1月至2017年3月经手术切除的90对癌组织及癌旁组织,采用实时定量PCR(QPCR)检测以上组织中miR-99a-5p及IGF1R mRNA水平;采用脂质体法向HepG2细胞分别转染miR-99a-5p模拟物(过表达组)和miR-99a-5p阴性对照(NC组),采用QPCR法检测转染48 h后各组的miR-99a-5p水平以评价转染效率;分别采用Transwell和划痕实验比较各组的侵袭和迁移情况;QPCR和Western blotting检测各组的IGF1R mRNA和蛋白水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-99a-5p对IGF1R的靶向作用.结果 QPCR检测结果显示,癌组织的miR-99a-5p水平为0.823±0.039,低于癌旁组织的1.016±0.013,而癌组织的IGF1R mRNA水平为1.329±0.024,高于癌旁组织的1.035±0.026,差异均有统计学意义(P＜0.05).过表达组转染48 h后的miR-99a-5p水平为1.487±0.027,均高于对照组的1.021±0.013和NC组的1.019±0.025,差异有统计学意义(P＜0.05).对照组、NC组和过表达组的愈合率分别为(60.5±2.4)％、(58.4±3.3)％和(42.1±2.9)％,穿膜细胞数分别为(92.1±3.7)个、(95.2±4.9)个和(36.7±4.5)个,过表达组的愈合率和穿膜细胞数均少于其余两组(P＜0.05);过表达组的IGF1R mRNA和蛋白水平均低于其余两组(P＜0.05).双荧光素酶报告基因试验结果显示,miR-99a-5p显著抑制野生型IGF1R-3'-UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性(P＜0.01),但是对突变型IGF 1R-3'-UTR荧光素酶活性无显著影响.结论 miR-99a-5p在肝癌中表达降低,且可抑制肝癌细胞的侵袭迁移过程,可能是通过靶向调控IGF1R来实现,可作为肝癌的潜在治疗靶点.
关键词： 肝癌 微小RNA-99a-5p 侵袭 迁移 胰岛素样生长因子1受体
