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CA11对胃癌细胞SGC-70901的放疗增敏作用
目的 研究CA11基因对人胃癌细胞株SGC7901放疗增敏的作用.方法 以pcDNA3 1-CA11质粒转染人胃癌细胞株SGC7901后对细胞株行放射处理,Western blot、RT-PCR检测凋亡相关酶Caspase-3的表达,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果 pcDNA3 1-CA11质粒转染的SGC7901放疗72 h后Caspase-3在mRNA、蛋白水平表达明显上调,CA11转染组细胞增殖抑制率为(35 41±3 78)%,较对照组的(7 32±0 92)%、空质粒转染组的(10 06±1 47)%,明显升高(均P<0 05);CA11转染组细胞凋亡率为(42 19±7 17)%,较对照组的(7 79±1 01)%、空质粒转染组的(20 43±6 24)%,明显升高(均P<0 05).结论 CA11基因对胃癌细胞株SGC7901细胞具有放疗增敏作用.
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胃癌相关分泌蛋白CA11与胃癌关系的研究
目的确定 CA11编码蛋白的性质,细胞水平、动物体内的功能,并探索其发挥作用的可能机制,以及与其它已知抑癌基因、癌基因的调控关系.方法将 CA11克隆至 pcDNA3.1/Myc-His(- )A载体. CA11与空载稳定转染胃癌细胞株 7901,细胞爬片后行抗 Myc标签及 8种抑癌基因、癌基因的细胞免疫组织化学分析. CA11与空载稳定转染胃癌细胞株 7901,分别行生长曲线及裸鼠荷瘤实验,流式细胞仪分析细胞周期.结果含有 Myc标签 CA11编码蛋白存在于 CA11转染的胃癌细胞浆、细胞膜上及膜外. CA11稳定转染胃癌细胞株 7901及裸鼠荷瘤实验表明, CA11能显著抑制其生长 [21 d,(292. 29± 28. 76)mm3与 (1 330. 50± 110. 07)mm3比较, P< 0. 01],转染 CA11的胃癌 7901细胞 G1 65. 5、 S 24. 7, 与对照组空载转染 7901细胞 G1 50. 5、 S 37. 1相比, G1期增多而 S期减少. 8种已知抑癌基因、癌基因在 CA11与空载稳定转染胃癌细胞株 7901均无表达.结论证实 CA11编码蛋白为一分泌蛋白 ,在细胞水平及动物体内均能明显抑制胃癌细胞的生长,它与多种已知抑癌基因、癌基因并无相互调节的关系.
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胃癌下调新基因CA11表达产物的组织分布和细胞定位
目的筛选胃癌下调基因,确定其表达产物的组织分布和细胞定位.方法从已成功建立的5人份正常胃粘膜mRNA(Tester)抑制消减杂交胃癌mRNA(Driver)的差异表达文库,随机挑取阳性克隆测序为CA11,RT-PCR证实其为下调基因.地高辛标记CA11原位mRNA杂交.在其它组织器官中扩增此基因,以表明其组织分布特异性.CA11克隆至载体pcDNA3.1/Myc-His(-)A中,并瞬时转染CA11的COS-7细胞.生长至对数生长期时,吸取培养液,Talon吸附、洗脱后,取洗脱液进行SDS蛋白电泳及Western blot .CA11转染COS-7细胞后加抗Myc标签的一抗,后加FITC标记的二抗在荧光显微镜下观察.结果筛选到胃癌下调基因CA11,并经RT-PCR证实.mRNA 原位杂交显示,CA11位于胃粘膜上皮细胞.在其它组织器官cDNA文库及组织RNA中均未扩增出该基因.洗脱液Western blot 未检测到CA11与pcDNA3.1/Myc-His(-)A 的Myc融合表达蛋白存在;CA11表达蛋白亚细胞定位于细胞浆.结论 CA11为一胃癌下调基因,它在胃粘膜上皮细胞特异表达,表达产物定位于细胞浆.
