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  • PCR结合基因扫描分析技术对几种深部真菌病致病菌的快速检测及鉴定

    作者:王英;刘维达;顾军;赵敬军;陶苏江;吕桂霞

    目的用PCR法快速鉴定22种(23株)深部真菌病致病菌种.方法应用荧光标记的真菌通用引物ITS4与ITS86对22种(23株)深部真菌病致病菌种的菌悬液进行PCR扩增,扩增产物经ABIPRISMTM 377测序仪及基因扫描分析软件精确测定片段大小,与对照组--相应菌种采用传统方法抽提DNA后扩增片段的扫描分析结果相对照.结果①17种致病菌种菌悬液经ITS4、ITS86扩增出单一的片段(除了构巢曲霉和黑曲霉、白念珠菌和类星形念珠菌、裴氏着色真菌和皮炎外瓶霉片段长度相同).②菌悬液扩增片段的扫描分析结果与其DNA扩增结果相近,差异无显著性.③整个检定过程仅需6 h.结论采用ITS通用引物及菌悬液PCR检测法,结合基因扫描分析技术可准确、特异、快速、敏感地检测并鉴定出22种深部真菌病致病菌种,这将有望成为快速诊断深部真菌病的一种方法.

  • 16种支孢随机扩增 DNA多态性研究

    作者:席丽艳;龙泽香代子;Kaoru Okada;吴绍熙;福岛和贵

    目的了解支孢属腐生真菌与致病真菌的基因学特征及二者的关系。方法采用溴苯提取法提取基因组 DNA。以随机扩增 DNA多态性法对 16种支孢 26株菌的 DNA指纹图谱作了分析。结果①共选用 10个随机引物进行扩增,筛选出 2个具有稳定、清晰 DNA扩增带型的引物,即引物 2: 5′- AGCGTCCTCC- 3′,引物 5: 5′- CAGCACCCAC- 3′。② 26株菌 DNA带型不完全相同,有一定的种间和种内的遗传变异性,遗传相似性约为 37.4%。③同种菌具有较高的遗传相似性。④部分腐生菌与致病菌位于同一树组中。结论随机扩增 DNA多态性法研究发现支孢属内各种间有一定的遗传相似性,但腐生菌与致病菌的 DNA带型未见明显特征性差异。

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