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实验设计法文献资料
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基于实验设计法针对抗VEGFR2-MICA融合蛋白进行发酵工艺优化
中国仓鼠卵巢细胞(CHO)是目前生产治疗性抗体的主要表达系统,该细胞的培养和抗体表达与培养条件密切相关.本实验室构建出了一种靶向VEGFR2单抗融合MICA的融合蛋白,具有良好的抗肿瘤活性,但是抗体产量较低,限制了该抗体的进一步研发和应用.为了探究适合该抗体的佳发酵体系,本研究通过Minitab16.0正交法设计多种流加培养方式,探索了4种培养基、流加物以及培养条件对发酵细胞密度和抗体产量的影响,并优化出佳的发酵方式,即以1×106 cells/mL接种密度将细胞接种于商业培养基CDM4PerMAb,每2d加入12％ (V/V)的流加物Boost2+ Boost5.为保持抗体的稳定性和质量一致性,将此发酵方式扩大至3L发酵罐以提高抗体的批次产量.终抗体产量可达54.45 mg/L,并且Western blot实验结果验证了融合抗体装配的正确性.MTT实验结果表明JZB01能有效抑制HUVEC、MDA-MB-231和K562的细胞增殖,具有显著的抗血管生成作用以及比母体单抗更有效的抗肿瘤活性.综上,本研究开发出了一种有利于抗体生产的发酵工艺,能够满足实验室抗体研发需求.本实验室将进一步扩大该工艺适用的发酵规模,以满足抗体的临床前研究以及后续工业化生产.
