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B33-18 通过补料分批培养重组恶臭假单胞菌将甲苯生物转化为对羟基苯甲酸盐
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基于实验设计法针对抗VEGFR2-MICA融合蛋白进行发酵工艺优化
中国仓鼠卵巢细胞(CHO)是目前生产治疗性抗体的主要表达系统,该细胞的培养和抗体表达与培养条件密切相关.本实验室构建出了一种靶向VEGFR2单抗融合MICA的融合蛋白,具有良好的抗肿瘤活性,但是抗体产量较低,限制了该抗体的进一步研发和应用.为了探究适合该抗体的佳发酵体系,本研究通过Minitab16.0正交法设计多种流加培养方式,探索了4种培养基、流加物以及培养条件对发酵细胞密度和抗体产量的影响,并优化出佳的发酵方式,即以1×106 cells/mL接种密度将细胞接种于商业培养基CDM4PerMAb,每2d加入12％ (V/V)的流加物Boost2+ Boost5.为保持抗体的稳定性和质量一致性,将此发酵方式扩大至3L发酵罐以提高抗体的批次产量.终抗体产量可达54.45 mg/L,并且Western blot实验结果验证了融合抗体装配的正确性.MTT实验结果表明JZB01能有效抑制HUVEC、MDA-MB-231和K562的细胞增殖,具有显著的抗血管生成作用以及比母体单抗更有效的抗肿瘤活性.综上,本研究开发出了一种有利于抗体生产的发酵工艺,能够满足实验室抗体研发需求.本实验室将进一步扩大该工艺适用的发酵规模,以满足抗体的临床前研究以及后续工业化生产.
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产腺苷甲硫氨酸酿酒酵母补料分批培养工艺的优化
对酿酒酵母工程菌Saccharomyces cerevisiae mls1△acs2-MetK在20 L发酵罐中合成腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)的补料分批培养工艺进行优化,增加糖蜜的流加时间,提高溶解氧水平;在此基础上,测定发酵过程中前体甲硫氨酸的消耗曲线,在发酵后期流加前体甲硫氨酸以提高SAM产量.结果表明,在32 ～ 72 h流加糖蜜发酵,终SAM产量和生物量分别达到6.16 g/L和20.83 g/L.将溶解氧水平提高至30％,发酵136 h,终SAM产量和生物量分别达到11.40 g/L和25.24 g/L.在此基础上,从96 h开始流加甲硫氨酸至发酵结束,终SAM产量和生物量分别达到15.23 g/L和28.81 g/L.与未优化的工艺相比,SAM产量提高了147.24％.通过流加糖蜜、甲硫氨酸,提高溶解氧,可以有效提高酿酒酵母在20 L发酵罐中的SAM产量和生物量;该工艺在工业化生产中具有潜在的应用价值.
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重组大肠杆菌高密度发酵工艺进展
重组大肠杆菌高密度发酵技术(High cell density cultivation,HCDC)是现代发酵工程的一项新技术,能显著提高基因工程产品的产量.本文就影响重组大肠杆菌高密度发酵产牟几个关键因素,包括宿主菌类型、培养基组成、诱导剂的选择、培养条件的选择、补料方法的选择、抑制性代谢产物的影响等做一综述,分析这些条件对菌体和重组蛋白的影响,介绍大肠杆菌高密度培养领域的一些研究进展.
