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中华鳖致病性嗜水气单胞菌的分离鉴定及毒力因子检测
从患病的中华鳖肝脏分离到一株优势生长菌.对分离菌进行了形态特征、理化特征等表型生物学特征检验、毒力因子检测,同时应用分子生物学方法测定了分离菌株的16S rRNA基因序列,判定该菌为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ahydrophila).对分离菌采用PCR方法进行溶血素hly和气溶素aer基因的检测,结果显示分离菌携带hly和aer基因.
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嗜水气单胞菌气溶素的纯化及其溶血特性分析
目的 用亲和纯化法纯化嗜水气单胞菌气溶素,从单因子水平分析嗜水气单胞菌的溶血特性.方法 用嗜水气单胞菌气溶素单克隆抗体McAb 3C12B11为配体制备亲和层析柱,甘氨酸洗脱以获得纯化的嗜水气单胞菌ZN1气溶素.获得的纯化气溶素分别与1%欧洲鳗鲡血红细胞、1%兔血红细胞、1%羊血红细胞进行溶血特性分析,并利用单克隆抗体McAb 3C12B11进行溶血抑制试验.结果 经亲和纯化获得分子量约为51.7kDa的气溶素,该气溶素能在Western-blotting反应中被嗜水气单胞菌ZN1 胞外产物(ECPs)免疫血清和McAb 3C12B11所识别.溶血试验证实亲和纯化的ZN1气溶素和ZN1 ECPs对兔血红细胞、欧洲鳗血红细胞和绵羊血红细胞的溶血效价分别为5.12×104 HU/mg、3.20×103HU/mg、6.40×103 HU/mg和2.56×104HU/mg、1.28×104 HU/mg、3.20×103 HU/mg.溶血抑制试验结果 表明:当红细胞为1%兔血红细胞时,McAb 3C12B11对气溶素和ZN1 ECPs的溶血抑制效价均为1∶211 ;当红血细胞为1%欧洲鳗血红细胞时,McAb 3C12B11对气溶素的溶血抑制效价为1∶210,对ZN1 ECPs的溶血抑制效价仅为1∶23.结论 嗜水气单胞菌气溶素在单因子条件下与嗜水气单胞菌ECPs的溶血特性存在一定的差异,嗜水气单胞菌ZN1 ECPs中存在多种溶血性毒素,这些毒素对不同宿主的溶血能力存在差异,同一嗜水气单胞菌菌株对不同的宿主起主要作用的溶血性毒素不同.
