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安徽省114株EHEC O157:H7菌株毒力因子基因的初步分析
目的对安徽省近几年分离的肠出血性大肠杆菌O157:H7(EHEC O157:H7)菌株的毒力因子基因进行实验室检测,以分析和研究肠出血性大肠杆菌O157:H7的毒力特征和致病特性.方法采用聚合酶链反应(PCR)检测EHEC O157:H7的两种重要的毒力因子志贺样毒素(SLT)和溶血素(hly)的特异性基因片段,并辅以血清学试验、生化试验进行菌株的生物学特性鉴定.结果和结论检测结果显示,有63.2%的EHEC O157:H7菌株携带SLT、hly基因,动物源的菌株以家禽较高,家畜次之,3株源自腹泻病人的菌株毒力因子基因携带率为33.3%,说明分离的EHEC O157:H7菌株具有较强的致病性;114株菌株中,有14.0%的菌株在24h内发酵山梨醇,发酵山梨醇菌株的毒力因子基因携带率18.8%,显著低于不发酵菌株的70.4%,显示出山梨醇发酵特性变异与毒力因子基因缺失之间具有一定的关联性.
关键词： EHEC O157:H7 志贺毒素 溶血素 基因 聚合酶链反应 -
生物信息学在毒力岛研究中的应用
1986年Hacker等在泌尿道致病性大肠杆菌(UPEC)536株染色体上发现两个可以发生缺失的大片段,片段丢失后,细菌产生溶血素和P菌毛的能力随之丧失,细菌的毒力受到影响.在此发现的基础上于1994年提出了毒力岛(pathogenicity island)的概念,认为毒力岛是整合于细菌基因组的外源性DNA片段,这些特殊片段存在于致病型菌株上,赋予细菌毒力,却在与之亲缘关系密切的非致病菌株上不存在.
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蒜氨酸+蒜酶对环磷酰胺处理小鼠免疫功能的影响
目的探讨蒜氨酸+蒜酶对环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠体液免疫功能的免疫调节作用.方法采用环磷酰胺腹腔注射法建立免疫抑制模型,给予蒜氨酸+蒜酶,观察小鼠免疫器官重量及腹腔巨噬细胞吞噬率,测定血清半数溶血值(HC50).结果对环磷酰胺所致免疫低下小鼠,蒜氨酸+蒜酶可明显提高腹腔巨噬细胞吞噬功能(P＜0.05),促进血清溶血素形成,但对免疫器官重量无影响.结论蒜氨酸+蒜酶对环磷酰胺所致体液免疫功能低下有免疫保护作用,对其非特异免疫、特异性体液免疫都有上调作用.
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血细胞分析仪常见故障的处理
故障一:WBC值超高.故障处理:科室反映WBC值超高,造成WBC值超高的原因较多.首先想到的原因,溶血素是否用完,或者更换了溶血素但没有执行“服务/维护”中的“更换溶血素”操作;发现溶血素加量正常,而且HGB的值正常,基本排除溶血素的问题.其次考虑环境因素的影响,检查结果中只有WBC值这一项高,RBC及PLT都在正常范围之内,环境因素的影响排除.再次可能是模拟板或计数池不良造成:(1)分析是否存在加入溶血素时混匀不均现象,打开计数池外罩,认真观察打气泡情况,发现打气泡正常,说明混匀没有问题.(2)模拟板更换后,故障故障依然存在,只好把旧件换回.
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AC900血球计数仪常见故障维修方法
1 故障排除1.1 RBC/HGB不稳定.解决方法:血样的混匀;检查稀释液注射器是否漏液;检查计数杯的液体是否排完;检查3号电磁阀是否故障,检查吸样注射器和吸样针O形圈.1.2 RBC/PLT低、高不稳定.解决方法:计数杯中的气泡混匀-10号阀处的硅胶管.1.3 RBC/PLT非常低,HGB和WBC非常好.解决方法:检查稀释液管和溶血素管道是否被互换.
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意大利H12型血细胞分析仪配套试剂国产化的研制与应用
本文报告了研制意大利H12型血细胞分析仪的稀释液、溶血素、清洗液国产化替代进口配套试剂,通过实验结果表明:自制配套试剂与进口配套试剂的理化参数、渗透压、导电率、PH值、离子浓度相似,用自配试剂和进口试剂的随机测定50份全血标本,精密度批内CV值均在允许范围内,经t检验各项数据指标均无显著意义(P>0.05),相关试验(n=50)呈高度相关,相关系数r=0.8,室内、室间质控均符合要求,经一年试用,我们认为该试剂完全可以替代进口试剂.
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扶正升压片对小鼠免疫作用的实验研究
目的观察扶正升压片对小鼠的免疫功能的影响.方法通过小鼠的碳粒廓清试验,观察其对小鼠非特异性免疫功能,用绵羊红细胞免疫小鼠,测定绵羊红细胞溶血素抗体生成水平.结果扶正升压片对正常小鼠网状内皮系统吞噬功能有明显增强作用,提高血液溶血素生成水平,提高小鼠外周血液中T淋巴细胞百分比.结论扶正升压片能够提高小鼠的免疫功能.
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马鞍山地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子特征研究
目的 了解马鞍山地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(金葡菌)(MRSA)肠毒素、溶血素分布情况、菌株克隆群关系及其耐药性.方法 采用全自动酶联荧光免疫系统和PCR技术分别检测肠毒素和溶血素基因分布;选择金葡菌的7个管家基因作为目的基因,对34株MRSA和3株甲氧西林敏感金葡菌(MSSA)进行多位点序列分型(MLST),然后与网上数据库比对,获得序列型(ST),根据eBURST的ST进行亲缘性分析;采用琼脂稀释法检测MRSA对12种抗生素的耐药情况.结果 210株金葡菌肠毒素阳性率为50.9％,溶血素基因携带率为97.1％,其中51株MRSA全部含有溶血素基因.34株MRSA有10个ST,以ST239为主(47.1％,16/34),其次为ST5(17.6％,6/34);3株MSSA的ST为ST188、ST1281和ST7.17株患者来源菌株分为6个ST,以ST239为主(35.3％,6/17),其次为ST5(29.4％,5/17);20株食品来源菌株有9个ST别,以ST239为主(45.0％,9/20),其次为ST7(15.0％,3/20).ST585、ST630以及ST239的亲缘关系较近,其他ST之间亲缘关系较远.除万古霉素外,所有菌株对10种抗生素有不同程度的耐药.结论 金葡菌溶血素普遍存在;ST239为马鞍山地区MRSA的主要优势菌株,各ST间亲缘关系较远.
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肠出血性大肠埃希菌O157:H7引起的溶血性尿毒综合征患者血清抗体调查
目的对1999年某地出现的一批先有腹泻病症状后继发急性肾功能衰竭(肾衰)的患者进行血清学调查和诊断.方法使用基因克隆表达纯化的肠出血性大肠埃希菌(EHEC)-溶血素(Hly)和EHEC O157脂多糖(LPS)为抗原,对采集自42例肾衰患者的血清标本进行蛋白印记试验.结果 EHEC-Hly的检测发现,IgG抗体阳性21份,阳性率50.0%; IgM抗体阳性16份,阳性率38.1%;在11份标本中同时检测到IgG和IgM抗体,阳性率26.2%;检测到IgG或IgM抗体阳性的标本26份,阳性率61.9%.EHEC O157 LPS的检测发现,24份标本分别检测到IgG和IgM抗体,阳性率各为57.1%;在29份标本中检测到IgG或IgM抗体,阳性率69.0%;在20份标本中检测到IgG和IgM抗体,阳性率47.6%.在42份血清标本中同时检测到EHEC-Hly和O157 LPS的特异性抗体的标本22份,阳性率52.4%;检测到EHEC-Hly或O157 LPS的特异性抗体的标本34份,阳性率81.0%.结论结合细菌学和血清学诊断结果、临床症状和流行病学分析,可以认为这些患者感染了EHEC O157:H7.在分离不到病原菌的情况下,检测患者血清标本的EHEC-Hly和/或EHEC O157 LPS的特异性抗体,不失为一种可以考虑的诊断方法.
关键词： 大肠杆菌O157:H7 溶血性尿毒综合征 溶血素 脂多糖 -
致病性猪链球菌主要毒力因子基因多重PCR检测
目的建立多重PCR体系,实现猪链球菌毒力相关因子基因cps、mrp、epf(epf*)和sly的同步检测.方法根据上述毒力因子基因核苷酸序列,设计和合成4对特异性引物,通过体系和条件优化,建立多重PCR检测方法,并对72株种属背景明确的实验菌株(其中猪链球菌48株、阴性对照株24株)及49株猪临床分离的链球菌样本进行检测分析.结果48株猪链球菌中,c加2检出率为33 3%(16/48)、mrp检出率为29.2%(14/48)、epf检出率为25%(12/48)、epf*检出率为6.3%(3/48)、sly检出率为54.2%(26/48),上述检测结果与菌株的毒力因子背景情况完全相符;24株阴性对照和49株猪临床分离样本毒力因子检测结果均为阴性.结论多重PCR可用于猪链球菌毒力相关因子CPS2、MRP、EF、Sly的基因检测,特异性和敏感性好,为该病快速诊断和分子流行病学调查提供了新的技术手段.
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清解宁对小鼠免疫功能的影响
目的:研究清解宁对小鼠免疫功能的影响.方法:用绵羊红细胞(SRBC)免疫小鼠,分别用小鼠脚掌厚度测量法观察迟发性超敏反应(DTH)、溶血分光光度法观察体外抗体形成细胞数(PFC)、微量血凝法观察溶血素、MTT法观察脾T、B淋巴细胞的增殖功能,腹腔MΦ吞噬中性红比色法观察腹腔MΦ吞噬中性红的能力.结果:清解宁能明显抑制SRBC免疫小鼠的DTH、PFC、溶血素、脾T、B淋巴细胞的增殖以及腹腔MΦ吞噬中性红的能力.结论:清解宁对SRBC免疫小鼠的免疫功能具有明显的抑制作用.
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护肝素片对小鼠免疫功能的影响
目的:观察护肝素片对小鼠免疫功能的影响.方法:用正常小鼠作为实验动物.结果:护肝素片能显著提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数,促进溶血素和溶血空斑的形成和淋巴细胞的转换.结论:护肝素片有好的免疫兴奋作用.
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紫七软肝颗粒对小鼠免疫功能的影响
目的:研究紫七软肝颗粒对正常及免疫低下小鼠免疫系统的影响.方法:用碳粒廓清实验研究紫七软肝颗粒对正常小鼠网状内皮系统及脾脏指数、胸腺指数的影响;用环磷酰胺造成免疫低下模型,观察紫七软肝颗粒对2,4-二硝基氯苯(DNCB)诱导的迟发性超敏反应(DTH)及小鼠血清溶血素含量的影响,并测定小鼠脾脏指数及胸腺指数.结果与结论:紫七软肝颗粒能增强正常小鼠网状内皮系统的吞噬功能,增强由环磷酰胺造成的免疫低下小鼠的迟发性超敏反应和血清溶血素含量,增加脾脏指数及胸腺指数.
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奶牛乳腺炎无乳链球菌Hly基因抗原表位的截短序列表达及抗原性研究
目的 截短克隆奶牛乳腺炎无乳链球菌溶血素(Hly)基因抗原优势区域,构建重组表达载体,实现原核细胞高效表达,进而对表达产物进行抗原性分析. 方法 根据GenBank公布的牛源无乳链球菌(CP018623.1)hly基因序列设计引物,以牛乳源性无乳链球菌1886菌株基因组DNA为模板,PCR扩增hly基因片段,构建重组质粒pET-30a-hly并转化至E.coli/BL21(DE3)中,经IPTG诱导高效表达后,并进行SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定.表达产物纯化后经水溶性501佐剂乳化,免疫昆明小白鼠,采用间接ELISA法测定血清抗体滴度. 结果 成功克隆奶牛乳腺炎无乳链球菌1886菌株hly基因,其碱基长度513 bp,编码171个氨基酸残基,与GenBank公布的牛源无乳链球菌(CP018623.1) Hly基因核苷酸序列及其编码氨基酸序列相似性为100％.重组质粒表达的重组蛋白分子质量单位约为30×103,纯化蛋白含量为1.2 mg/ml.Western blot检测重组蛋白可被相应抗体识别.ELISA检测重组蛋白免疫小鼠血清抗体滴度为1∶25 600. 结论 内蒙古分离株无乳链球菌Ⅰa型hly基因抗原优势序列编码多肽具有良好的抗原性,可以作为候选免疫抗原,为研究其致病机制及新型疫苗奠设计奠定了基础.
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牛乳源粪肠球菌cyla基因的克隆及编码蛋白抗原表位分析
目的 分离鉴定牛乳腺炎乳中的粪肠球菌并克隆其溶血素基因cyla. 方法 从内蒙古科左后旗一奶牛场采集奶牛乳腺炎乳样,进行粪肠球菌的分离、培养,生化试验和分子生物学鉴定及药敏试验;对溶血素基因cyla进行同源性比对并分析其编码蛋白的抗原表位. 结果 从奶牛乳腺炎乳中分离出粪肠球菌cyla基因序列比对及进化分析表明,分离菌与GenBank上公布的粪肠球菌序列(CP015883.1)的同源性达100％,与其处于同一个进化分枝,抗原性分析显示cyla基因编码蛋白具有一定的抗原表位区域.该菌具有溶血特性,对氨苄西林、万古霉素敏感,对四环素耐药. 结论 牛乳腺炎粪肠球菌cyla基因编码蛋白具有抗原表位,可作为粪肠球菌致奶牛乳腺炎防控疫苗研发的靶标抗原.
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粪肠球菌主要毒力因子研究进展
粪肠球菌为条件性致病菌,是许多国家医院内感染的主要病原菌,也是一种新的人畜共患病病原体.粪肠球菌感染和致死主要是由其毒力因子引起的,本文概述了粪肠球菌主要毒力因子尤其是溶血素的研究进展,为粪肠球菌致病机制的研究奠定基础.
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眼源性蜡样芽孢杆菌溶血素BL及其体外生物活性检测
目的 对经API细菌鉴定条所证实的眼源性蜡样芽孢杆菌进行溶血素BL(HBL)基因鉴定并进行体外毒理性试验.方法 根据溶血素结合亚基B、2个溶血亚基L1、L2三种组分的基因核苷酸序列,设计合成3对特异性引物,通过体系和条件优化,建立PCR检测方法,并对5株临床分离的眼源性蜡样芽孢杆菌进行检测分析；随机选取其中1株菌,利用盐析法提取溶血素,并以不同浓度剂量作用于绵羊红细胞、Vero细胞和Hela细胞,监测其对细胞的毒性；通过腹腔注射观察HBL对小鼠的致死作用,评估其毒力的强弱.结果 5株临床分离菌中,共检出3个基因；蜡样芽孢杆菌溶血素BL蛋白具有较强溶血活性,其溶血活性呈明显的时间-剂量依赖性；BL溶血素对Vero细胞和Hela细胞的作用所致的形态变化虽有不同,但结果均导致细胞死亡,其内容物释出；对小鼠的致死率同样存在时间-剂量依赖性,且2.0 HU/ml浓度以上的BL溶血素可使小鼠48 h的致死率达100％.结论 HBL具有较强的溶血活性,对临床分离的眼源性蜡样芽孢杆菌BL基因进行检测,3个基因均表达,为该菌感染后病情发展迅速、预后较差的临床表现提供了理论依据,同时为该病的快速诊断和分子流行病学调查提供了新的方法.
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蜡样芽胞杆菌溶血性肠毒素的提取及诊断方法的建立
蜡样芽胞杆菌是引起食物中毒的细菌之一[1].蜡样芽胞杆菌的溶血素具有肠毒素的性质[2],提取其溶血素可作为实验室诊断蜡样芽胞杆菌食物中毒和分析食品中残留毒素的诊断试剂.
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猪链球菌2型毒力因子多重PCR检测方法的建立与应用
猪链球菌2型是一种重要的人兽共患传染病,该病已成为严重影响各国养猪业发展的一种重要疫病,同时也是公共卫生防疫的重点[1-2].不同猪链球菌2型菌株的致病力不同,可分为高致病性毒株、低致病性毒株、不致病性毒株3种,这种致病力差异与各菌株的毒力因子直接相关,猪链球菌的毒力因子较为复杂,已知的毒力因子有溶菌酶释放蛋白(MRP)、细胞外蛋白因子(EF)、溶血素(SLY)、荚膜多糖(CPS)、IgG结合蛋白、毒力相关序列、黏着素等,不同地区分离的猪链球菌菌株,其毒力因子出现的概率也不一样,尚缺乏统一的评价标准[3-7].
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新型溶血素在临床检验中的价值分析
目的：分析研究新型溶血素在医学临床检验中的应用价值。方法：在我院进行健康体检的健康人血常规样本中，随机选择80例健康血常规样本，在80例常规人血样本中分别加入新型溶血素或传统溶血素。使用血细胞分析仪对这种溶血素在人血样本中的反应进行记录，记录人血中的血红蛋白（Hb），白细胞（WBC）以及血小板（PLT）的数量，并且对所记录得到数据均进行t检验，以保证其以准确性和科学性。结果：通过数据分析可以得出：在血红蛋白数量方面，应用新型溶血素的水平（123.1±4.9）相对传统溶血素水平（138.6±4.7）较差，且两者差异具有统计学意义（P＜0.05）。在对白细胞以及血小板的数量测定方面来看，新型溶血素水平以及传统溶血素的水平相比两者无明显差异，不具有统计学意义（P＞0.05）。结论：新型溶血素在血常规检查方面相对于传统溶血素安全可靠，可在医学临床上推广使用。
