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安徽省114株EHEC O157:H7菌株毒力因子基因的初步分析
目的对安徽省近几年分离的肠出血性大肠杆菌O157:H7(EHEC O157:H7)菌株的毒力因子基因进行实验室检测,以分析和研究肠出血性大肠杆菌O157:H7的毒力特征和致病特性.方法采用聚合酶链反应(PCR)检测EHEC O157:H7的两种重要的毒力因子志贺样毒素(SLT)和溶血素(hly)的特异性基因片段,并辅以血清学试验、生化试验进行菌株的生物学特性鉴定.结果和结论检测结果显示,有63.2%的EHEC O157:H7菌株携带SLT、hly基因,动物源的菌株以家禽较高,家畜次之,3株源自腹泻病人的菌株毒力因子基因携带率为33.3%,说明分离的EHEC O157:H7菌株具有较强的致病性;114株菌株中,有14.0%的菌株在24h内发酵山梨醇,发酵山梨醇菌株的毒力因子基因携带率18.8%,显著低于不发酵菌株的70.4%,显示出山梨醇发酵特性变异与毒力因子基因缺失之间具有一定的关联性.
关键词： EHEC O157:H7 志贺毒素 溶血素 基因 聚合酶链反应 -
一株不产志贺毒素的肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株的鉴定
目的 对一株不产志贺毒素的肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株进行血清生化特征及毒力基因鉴定.方法 对154菌株进行常规血清生化鉴定,使用聚合酶链反应(PCR)方法检测该菌的志贺毒素基因及其他毒力因子,同时以southern杂交、Hela细胞毒实验进行证实.结果 菌株154的志贺毒素PCR检测、shouthern杂交为阴性,Hela细胞毒定量结果显示该菌株不产生志贺毒素,毒力因子eae,hly检测为阳性.结论 菌株154是不产志贺毒素的肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株,且具有O157:H7菌株特异性的毒力因子.
关键词： 肠出血性大肠杆菌O157:H7 志贺毒素 鉴定 -
非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株血清型鉴定及主要毒力基因分析
目的 了解中国不同来源非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株血清型及主要毒力基因的流行情况.方法 采用O抗原基因簇特异性聚合酶链反应(PCR)结合全套O抗血清凝聚法确定O血清群,以PCR扩增和测序fliC基因确定H型;采用PCR方法对所有菌株进行stx1、six2、eae及ehxA基因检测.结果 434株非O157 STEC分离株中,除不可分型菌株外,共检测出82种O血清群和28种H型,其中O20∶H30、O2∶H32和O2∶ H45为优势血清型.stx1、stx2和stx1+stx23种志贺毒素基因型的检出率分别为25.35％、64.98％和9.68％,而eae和ehxA基因的阳性率分别为3.92％和32.95％.仅15株菌同时携带3种毒力基因,且主要为血清型O26∶ H11的腹泻患者分离株.结论 我国非O157 STEC分离株血清型复杂多样,同时检测eae和ehxA基因对于发现高致病潜力的菌株具有重要参考价值.
关键词： 产志贺毒素大肠埃希菌 志贺毒素 血清群 血清型 毒力基因 -
产志贺毒素型大肠杆菌的研究进展
产志贺毒素型大肠杆菌(Shinga Toxin-producing Escherichia coli,STEC)能引起一系列人类疾病,包括水样腹泻(watery diarrhea)、出血性肠炎(hemorrhagic colitis,HC)、血小板减少性紫癜(thrombotic thrombocytopenic purpura,TTP)、溶血性尿毒综合征(hemolytic uremic syndrome,HUS).由STEC引起的消化道疾病在世界各地的暴发显示,这一类病原菌已成为威胁人类健康的重要致病菌.STEC菌株的分离、鉴定、致病性及所致疾病的流行特点等亟待人们进一步关注及了解.
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stx-PCR方法、Vero细胞毒性试验和酶联免疫试剂盒3种方法检测产志贺毒素大肠埃希菌的评估
目的 评价stx-PCR方法、Vero细胞毒性试验和酶联免疫试剂盒3种方法在检测产志贺毒素大肠埃希菌的特异性和敏感性的差异.方法 运用stx-PCR方法、Vero细胞毒性试验和酶联免疫试剂盒分别对29株大肠埃希菌参考菌株和45株食品分离大肠埃希菌株进行检测.结果 stx-PCR方法可以判定50株菌携带stx基因,同时Vero细胞毒性试验可以判定这些菌株具有细胞毒性,两者的一致性为100％;酶联免疫试剂盒能判定其中38株菌具有志贺毒素.结论 3种方法都具有很好的特异性.stx-PCR方法和Vero细胞毒性试验较酶联免疫试剂盒具有更高的敏感性,试剂盒适用于食源性疾病暴发事件中产志贺毒素大肠埃希菌的快速筛选,stx-PCR方法推荐作为实验室常规快速检测方法,Vero细胞毒性试验是检测产志贺毒素大肠埃希菌是否具有志贺毒素生物学活性的金标准方法.
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浙江省检出首例带stx2 O157:H7病人的报告
目前大多数学者认为肠出血性大肠杆菌O157:H7之所以能对人类致病,其致病因子为志贺毒素,并认为该毒素为肠出血性大肠杆菌(EHEC)所特有[1].浙江省于1997年首次在杭州人和动物中检出肠出血性大肠杆菌O157:H7后[2.3],又相继在宁波等地从动物中检出[4],但是都不带志贺毒素1(stx1)和志贺毒素2(stx2).本次检出的病人为浙江省首次发现带有stx2毒素的肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株.现报告如下.
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大肠埃希菌O157∶H7携带stx2::IS1203v基因研究
目的 了解中国部分地区大肠埃希菌O157∶H7菌株携带志贺毒素基因变异状况.方法 采用聚合酶链反应扩增志贺毒素基因,使用核苷酸序列测定判断是否存在志贺毒素的新变种,用HeLa细胞毒性实验研究其细胞毒性的变化.结果 1992-2002年中国部分地区分离到的289株产志贺毒素的大肠埃希菌O157∶H7中有3株菌携带的志贺毒素2(stx2)基因有1.3 kb的插入序列(IS)插入,且这段IS和IS1203变种(IS1203 variant,IS1203v)有100%的核苷酸序列同源性.IS1203v插入到3株大肠埃希菌O157∶H7 stx2基因的位置及开放性读码框(ORF)方向有所不同.除此之外,3株菌原有的stx2基因序列完全一致且为Stx2原型毒素.和Stx2原型毒素相比,这3株携带stx2::IS1203v基因的菌株对HeLa细胞的毒性明显降低.结论 分离到IS1203v插入stx2基因的大肠埃希菌O157∶H7菌株;IS1203v的插入可导致对HeLa细胞的细胞毒性降低.
关键词： 大肠埃希菌O157∶H7 志贺毒素 插入序列1203v -
徐州市2000年肠出血性大肠埃希菌O157:H7感染性腹泻的调查
目的了解徐州市丰县和铜山县肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7引起的出血性结肠炎(HC)在腹泻病患者中所占的比例,以及临床症状和肾功能变化的情况.方法使用EHEC O157胶体金快速检测试剂筛选粪便标本,阳性者使用免疫磁珠方法分离病原菌.对经过细菌学证实的EHEC O157:H7引起的HC患者,进行临床症状的观察和生化检验指标分析.结果 2000年5月份,丰县由EHEC O157:H7引起的HC占腹泻病患者0.98%,6月份铜山县的HC患者占腹泻病患者5.89%.在出现腹泻病症状的同时,18.5%患者的肾功能已经出现异常,表现为尿蛋白、血清肌苷或血尿素氮等指标的升高.在27例HC患者中,有14和13例分别分离到不产生志贺毒素和产生志贺毒素的EHEC O157:H7菌株.根据分离菌株是否产生志贺毒素将患者分为两组进行比较,尿蛋白阳性患者的比例分别为4/13和1/14,血小板减少患者的比例分别为6/13和3/14.统计学分析有显著意义.提示分离到产生志贺毒素的EHEC O157:H7菌株的患者,发生肾功能异常的可能性较大.结论此次调查证实了EHEC O157:H7感染所引起的HC在整个腹泻病患者中所占的比例随季节的变化而不同,感染产生志贺毒素EHEC O157:H7菌株的患者,发生肾功能异常的可能性要比不产生志贺毒素的大,还证实了在该菌感染的初期,患者的肾功能就已经出现了异常.
关键词： 大肠杆菌O157:H7 志贺毒素 腹泻病 -
我国部分产生志贺毒素肠出血性大肠埃希菌O157:H7脉冲电场凝胶电泳分型
目的探讨我国部分地区产生志贺毒素的肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7菌株的分布、流行以及分型情况.方法用脉冲电场凝胶电泳(PFGE)方法进行分型,辅以药物敏感性试验对51株产生志贺毒素的EHEC O157:H7菌株进行研究.结果根据细菌染色体DNA的XbaI酶切图谱,可将从江苏省徐州市等地分离的51株产生志贺毒素的EHEC O157:H7菌株分成8个PFGE型别(PFGE1～PFGE8),宁夏菌株为PFGE1型和2型,徐州菌株有6个PFGE型.1986～1988年的分离菌株属于PFGE7型,1999、2000年病人分离株的优势型别分别是PFGE5型与3型.1999年爆发性流行期间从患者分离的5株菌属于PFGE 5型,从家畜家禽的粪便、食品、蔬菜等标本分离的19株菌,可以分为PFGE3～6等4个型别,其中,PFGE5型占优势(10株菌).结论爆发性流行的发生与携带病原菌的家畜家禽粪便污染的食品、蔬菜等有关,从我国部分地区分离的EHEC O157:H7菌株的PFGE型别有地区性差异.
关键词： 大肠杆菌O157:H7 脉冲电场凝胶电泳 分型 志贺毒素 -
嗜酸乳杆菌对链霉素处理小鼠感染大肠杆菌O157∶H7的预防和治疗作用的观察
目的观察嗜酸乳杆菌对小鼠感染大肠杆菌O157∶H7的可能治疗作用. 方法使用口服链霉素处理的BALB/c小鼠为模型,在大肠杆菌O157∶H7 88-2364感染前或后,在不同时间经口给以嗜酸乳杆菌LAI,观察试验小鼠的临床症状、肠道和肾脏的病理改变、排菌时间以及粪便中志贺毒素对Vero细胞的毒性作用等. 结果发现口服嗜酸乳杆菌可以明显降低感染了大肠杆菌 O157∶H7小鼠的死亡率,降低通过粪便排泄病原菌的时间,以及降低粪便标本对Vero细胞的毒性作用. 结论口服嗜酸乳杆菌对感染大肠杆菌O157∶H7的小鼠有预防和治疗作用.
关键词： 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 嗜酸乳杆菌 志贺毒素 -
我国5个地区27株人源非O157产志贺毒素大肠埃希菌分子特征初步分析
目的 了解我国5个地区人源性非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株的分子生物学特征. 方法 对来源于5个地区的27株腹泻患者和健康人的非O157产志贺毒素大肠埃希菌进行血清分型、stx1和stx2基因检测及亚型分析、eae等黏附基因和其他毒力基因检测,并对菌株进行多位点序列分型(MLST)分析. 结果 27株非O157 产志贺毒素大肠埃希菌分为16种O∶H血清型;11株携带stx1a亚型,12株携带stx1c亚型,2株携带stx2e亚型,携带stx1a+stx2b、stx2d、stx2g亚型各1株;eae、efa1、saa、paa、toxB、astA及ehxA基因的检测率分别为18.5%、18.5%、29.6%、22.2%、11.1%、11.1%及25.9%.MLST将27株菌分为16种不同的ST型.结论 我国5个地区人源性非O157产志贺毒素大肠埃希菌菌株在血清型、志贺毒素亚型及毒力基因等方面存在多样性.
关键词： 非O157产志贺毒素大肠埃希菌 志贺毒素 血清分型 多位点序列分型 -
黄连素和6种抗生素对大肠杆菌O157∶H7中国分离株产生志贺毒素的影响
目的研究黄连素和6种常用抗生素对大肠杆菌O157∶H7中国分离株产生志贺样毒素的影响.方法利用志贺毒素对Vero细胞具有细胞毒性,并可使其释放乳酸脱氢酶(LDH)的原理,使用Vero细胞的细胞毒性检测试剂盒,检测培养基中的LDH的含量.结果将大肠杆菌O157∶H7在环丙沙星、氨苄西林、庆大霉素、链霉素、青霉素、红霉素的亚抑制浓度中培养后,可增加大肠杆菌O157∶H7对Vero细胞的毒性,但不同菌株有差异.环丙沙星对大肠杆菌O157∶H7的小抑制浓度很低,但其对Vero细胞毒性作用,随着药浓度的降低而增高.黄连素在试管内对大肠杆菌O157∶H7没有抑制作用.和抗生素相比,黄连素对大肠杆菌O157∶H7产生和释放志贺毒素比较小.结论黄连素在试管内对大肠杆菌O157∶H7的生长抑制作用不明显,其刺激大肠杆菌O157∶H7产生和释放志贺毒素的作用较抗生素小.
关键词： 大肠杆菌O157∶H7 志贺毒素 抗生素 黄连素 -
志贺毒素阴性的大肠埃希菌O157菌株的毒力因子检测
目的研究志贺毒素阴性的大肠埃希菌O157血清群菌株可能携带的毒力因子，以确定其致病群类型。方法对8株分离自杭州的志贺毒素阴性的大肠埃希菌O157血清群菌株及分离自美国和我国江苏的EHEC O157菌株，应用PCR技术检测stx、hly、EPEC和EHEC共有的eaeA、EHEC特异的eaeA，ELISA检测ETEC的耐热和不耐热肠毒素，HEP-2细胞粘附试验测定细菌与上皮细胞的粘附能力，并进行菌株质粒图谱分析。结果 8株志贺毒素阴性的大肠埃希菌O157菌株均未检出stx、hly、EHEC特异的eaeA以及ETEC的耐热和不耐热肠毒素，仅其中2株菌株携有EPEC和EHEC共有的eaeA，另3株菌株对HEP-2细胞有集聚性粘附能力。结论目前我国检获的大肠埃希菌O157菌株其致病类型表现为多样性，部分菌株尚不能明确其毒力因子。EHEC O157的鉴定必须重视毒力因子的检测。
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产志贺毒素肠聚集性大肠埃希菌感染的检验诊断与防治
2011年5月起,德国出现新型肠出血性大肠埃希菌(enterohhaemorrhagic Escherichia coli,EHEC)感染的疫情,来势凶猛,很快蔓延到英国、荷兰、法国、奥地利、挪威、西班牙、瑞士、丹麦、芬兰、捷克等几乎整个欧洲国家,美国也发现了确诊病例.截止6月底,已报告有3600余人发病,死亡52人[1].
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江苏省徐州市分离的大肠杆菌O157:H7菌株携带志贺毒素2型别的变化
目的研究我国分离的大肠杆菌O157:H7菌株的志贺毒素型别的变化.方法使用针对志贺毒素2及其变种的引物对进行PCR检测、细菌染色体DNA的PstI酶切后的Southern印迹实验和PCR产物的HaeⅢ、RasⅠ酶切分析,以及PCR产物克隆后的序列分析方法以及致病性大质粒的PstI酶切分析.结果 1999年分离自徐州市的人的5株菌均携带slt1 、slt2,而2000年从江苏省徐州市患者分离的10株和蜣螂标本分离的4株共计14株大肠杆菌O157:H7菌株仅携带slt2vha毒素基因,其致病性质粒的限制性酶切图谱与1999年的菌株相比也发生了改变.结论鉴于江苏省徐州市1999年的分离的5菌株全部携带slt1和slt2基因,结果提示该地的优势菌型发生了改变,可能当地大肠杆菌O157:H7感染的流行病学特点有关.针对slt2变异基因而设计的引物及其以此为基础进行的限制性片段长度多态性分析的方法对于研究O157:H7菌株的志贺毒素型别的变化能够满足特异性及灵敏性的要求.
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产志贺毒素大肠杆菌毒力基因检测
目的分析河南省2000～2002年分离的351株与产志贺毒素大肠菌(STEC)感染有关的菌株,了解不同来源标本各种毒素基因携带模式.方法应用多重PCR技术,检测所有菌株志贺毒素(stx1和stx2)、hlyA、eaeA、rfbO111和rfbO157基因.结果 351株待检菌株分为枸橼酸杆菌、O157:H7大肠杆菌、rfbO157基因阳性不携带志贺毒素基因的大肠杆菌和rfbO157基因阴性携带志贺毒素基因的大肠杆菌4种不同类型.4种类型菌株具有6种rfbO157、stx2、stx1基因模式.携带志贺毒素基因的菌株主要源自波尔山羊、普通本地羊和病人,其它家畜家禽中有不同程度感染STEC.结论河南省存在STEC的感染,主要以O157:H7大肠杆菌为主,但也存在其它非O157的STEC.
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双重荧光定量PCR检测志贺毒素stx1和stx2基因
目的 建立一种双重荧光定量PCR检测志贺毒素stx1和stx2基因的方法.方法 根据不同细菌来源的stx1和stx2序列,设计PCR引物和TaqMan探针,建立双重实时荧光定量PCR检测体系,进行灵敏度、特异性和重复性评价,并对腹泻患者粪便样本进行检测分析.结果 双重实时荧光定量PCR检测含志贺毒素基因重组质粒的低检测下限为102 copies/mL;该法对12种常见肠道病原菌均无特异性扩增,对不同浓度的标准质粒检测重复性高,Ct值变异系数均小于10％;对急性腹泻粪便标本的检测阳性率高于细菌分离培养.结论 建立的双重实时荧光定量PCR可作为不同细菌来源的志贺毒素基因的快速鉴定方法,亦可用于人感染性腹泻标本的快速筛查.
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溶血尿毒综合征诊断与治疗
溶血尿毒综合征(hemolytic uremic syndrome,HUS)是以微血管性溶血性贫血、血小板减少及急性肾功能衰竭为特征的一种综合征,是儿童继发性血小板减少的原因之一.近年来本病发病有增多趋势,临床医师应该提高对本病重视.1 病因及分类1.1 临床分类临床依据有无腹泻,将HUS分成典型HUS及非典型HUS.(1)典型HUS:又称腹泻相关性HUS(post-diarrheal,D+HUS).90％的儿童HUS属于此种类型.患儿多有血样便、水样便等消化道前驱症状,临床症状由感染产生的志贺毒素(Shiga toxin,Stx)导致,故又称之为Shiga毒素相关性HUS(Shiga toxin associated HUS,Stx HUS).
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细菌性感染性疾病的继发症
一、与感染性疾病病原微生物生成的致病因子相关的继发症与感染性疾病病原微生物所生成致病因子相关的继发症,可列举出伴发于肠出血大肠埃希菌[特别是产生Vero毒素(VT)或称志贺毒素(Stx)的O157株]感染的溶血性尿毒症综合征(HUS).HUS这一病症(综合征)是一个早已存在的综合征,只是没有被充分认识.事实上,初报道HUS的是Gasser等1955年所作的报告.但是在而后的漫长期间始终未能揭示其真正的原因.
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肠出血性大肠埃希菌感染与溶血性尿毒症综合征
一、肠出血性大肠埃希菌大肠埃希菌本是家畜和健康人肠道内的常驻菌,几乎不使人致病.但部分大肠埃希菌可使人发生腹泻,统称为致腹泻性或致病性大肠埃希菌(表1).肠出血性大肠埃希菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)依其临床症状而得名,依其所产毒素又称为产Vero毒素性大肠埃希菌(verotoxin-producing E.coli),或称志贺毒素生成性大肠埃希菌(Stx-producing E.coli).
