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应用多重PCR方法检测大肠埃希菌O157：H7的初步研究
目的研究一种快速、特异的检测大肠埃希菌(以下称大肠杆菌)O157：H7的复合PCR方法。方法选用针对大肠杆菌O157：H7志贺样毒素Ⅰ、Ⅱ(SLT-Ⅰ、SLT-Ⅱ)和溶血素(Hly)基因的三对引物，在同一扩增体系中进行PCR，检测12株不同来源的O157：H7大肠杆菌及其它致病性大肠杆菌及沙门菌、志贺菌15株。结果除质粒缺失株(933)外，其余11株O157：H7大肠杆菌均在361bp处有溶血素基因产物出现；而12株O157：H7大肠杆菌扩增后的两条志贺样毒素基因产物存在差异，其中6株在210bp、484bp处出现两条相应产物，3株仅有210bp一条SLT-Ⅰ基因产物，另3株仅有484bp的SLT-Ⅱ基因产物。其它致病性大肠杆菌及沙门菌、志贺菌的扩增结果均为阴性。结论本复合PCR方法具有较高的特异性，可迅速、有效地将O157：H7大肠杆菌与其它常见致病性大肠杆菌及沙门菌、志贺菌相鉴别，通过进一步研究有望应用于临床大肠杆菌O157：H7感染的辅助诊断。
关键词： 大肠埃希菌O157：H7 聚合酶链反应 志贺样毒素 溶血素 -
迟缓爱德华菌溶血特性
目的研究迟缓爱德华菌溶血素的特征。方法平板检测法，接触溶血法，上清检测法。结果讨论了迟缓爱德华菌溶血特性及检测的影响因素。结论迟缓爱德华菌至少存在两种溶血素，其溶血活性受环境影响表现不同。
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迟缓爱德华菌溶血活化蛋白EHA的原核表达及生物学活性
目的 研究迟缓爱德华菌(Et)溶血活化基因(eha)原核表达蛋白EHA的生物学特性.方法 构建重组载体pET28a+-eha,转入大肠埃希菌BL21,得到克隆子pEHA1.克隆子pEHA1超声破碎后离心, 上清用SDS-PAGE电泳分析.在不同条件下,IPTG诱导pEHA1菌表达EHA蛋白,该蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,检测其溶血活性及Vero细胞毒性.结果 测序结果表明,pET28a+-eha重组质粒的eha序列完全正确.SDS-PAGE电泳显示表达出一条17 kDa左右的条带.在30 ℃,IPTG浓度为0.5 mmol/L的情况下,克隆子pEHA1被诱导6 h产生的蛋白量多.纯化的EHA蛋白无溶血活性及Vero细胞毒性.结论 eha基因不是溶血素结构基因,可能是一个调控基因.
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双曲钩端螺旋体溶血素基因tlyA的克隆、表达及初步功能鉴定
目的 研究双曲钩端螺旋体(简称双曲钩体)是否含有溶血素基因,并鉴定其溶血活性.方法 对双曲钩体LEBIa2503基因编码产物进行结构域预测、序列比对后,PCR扩增目的片断,克隆到原核表达载体pET28b(+),转化宿主细胞,并诱导表达产物进行初步功能鉴定.同时,以RT-PCR检测LEBIa2503的转录情况.另外,也对双曲钩体菌体本身有无溶血活性进行检测.结果 双曲钩体LEBIa2503基因与问号钩体tlyA溶血素基因在蛋白水平上有相同的结构域,属于直系同源基因(orthologues gene).原核表达的重组融合蛋白在羊血平板上出现β-溶血环.以RT-PCR的方法能检测到在双曲钩体中有LEBIa2503基因的转录,但双曲钩体菌体本身则检测不到溶血活性.结论 未发现双曲钩体有溶血活性,但其含有溶血素基因tlyA,并且在普通培养环境下能被转录,这对进一步研究其内在机制奠定了基础,并对探索致病性问号钩体致病机制提供了一定线索.
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粪肠球菌溶血素cylL 基因的原核表达
目的 克隆表达粪肠球菌溶血素cylL基因,为制备单抗、开发疫苗及其致病机制研究奠定基础.方法 从粪肠球菌中扩增溶血素cylL基因,相应酶切后,克隆到原核表达载体pET42a中,构建pET-cylL重组质粒.将pET-cylL质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3).经KpnI、XhoI酶切及测序鉴定,以IPTG诱导表达融合蛋白,用SDS-PAGE、Western blot进行分析.结果 PCR体外扩增cylL基因产物约206bp,成功构建了重组表达质粒pET-cylL;SDS-PAGE、Western免疫印迹显示蛋白表达带的分子量约为39.6kD.结论 成功构建粪肠球菌溶血素cylL基因的重组表达质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.
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问号钩端螺旋体溶血素基因特征分析
目的预测问号钩端螺旋体黄疸出血型赖株致病因子--溶血素基因,并对其编码蛋白结构特征进行深入分析.方法使用NCBI,Swissprot/TrEMBL,ProDom,Pfam,Jpred2,TMpred,SignalP,ClustW对问号钩端螺旋体黄疸出血型赖株溶血素基因诠释,所编码蛋白进行在线分析,并使用Bioedit软件进行氨基酸同源性比较分析.结果确定了问号钩端螺旋体黄疸出血型赖株9个溶血素基因,分为两大类:鞘磷脂酶类溶血素基因和非鞘磷脂酶类溶血素基因.并对溶血素基因编码蛋白二级结构、结构域、跨膜区域、信号肽及进化等进行了分析.结论多种类型多条溶血素基因同时存在于钩端螺旋体菌中,暗示溶血素基因和钩端螺旋体致病性之间有密切的关系,可能在致病过程中起重要作用.
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蜡样芽胞杆菌溶血性肠毒素的提取及生物学活性分析
蜡样芽胞杆菌是国内引起细菌性食物中毒的常见细菌之一,提取其溶血性肠毒素有助于阐明它的发病机理,有可能制备诊断试剂,从而达到预防和控制蜡样芽胞杆菌食物中毒的目的.从国内引起食物中毒的100株蜡样芽胞杆菌中,选出试验用菌株.从培养后的上清液中,经过盐析、离子交换柱层析、制备性凝胶电泳提取蜡样芽胞杆菌溶血素.溶血素由B、L1和L2 3种成份组成,分子量分别为35、36和45kDa 3种成份的协同作用在血琼脂上引起靶状溶血,使兔皮肤血管通透性增加,兔小肠肠段结扎产生积液反应,Vero细胞形态学改变.提示蜡样芽胞杆菌溶血素具有肠毒素的性质,试验也证实所提取的溶血素有免疫原性和免疫反应性
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单核细胞增生李斯特菌溶血素的研究进展
单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)属于李斯特菌属,与其同属的还有伊万诺夫李斯特菌(L.ivanovii)、无害李斯特菌(L.innocua)、威斯梅尔李斯特菌(L.welshimeri)和西里杰李斯特菌(L.seeligeri),L.ivanovii仅感染反刍动物,而LM是人畜共患李斯特菌病的主要病原,亦是四大食源性病原菌之一.
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RTX毒素的特征及检测
RTX(repeats in toxin)毒素家族是由部分革兰阴性菌所合成的毒素蛋白所组成,包括细胞毒素,金属蛋白酶,脂肪酶和溶血素等[1],代表毒素蛋白氨基酸序列的重复[2],目前RTX毒素家族有20多种毒素蛋白(见表1).
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肠球菌溶血素与其致病力的关系
目的探讨肠球菌溶血素的毒力因子作用.方法分别检测39株临床标本分离的粪肠球菌以及31株健康人群粪便分离的粪肠球菌的溶血素检出率;并检测了β溶血肠球菌、非β溶血肠球菌对9种抗生素的敏感性.结果临床菌株的溶血素检出率为58.9%,健康人群分离株的溶血素检出率为19.3%(P＜0.005);β溶血株对抗生素的耐药性明显高于非β溶血株(P＜0.01).结论以上结果提示肠球菌溶血素与其毒力有关.
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二乙基二巯基氨基甲酸钠对环磷酰胺致免疫低下小白鼠兔疫功能的影响
采用碳廓清除率;迟发型超敏反应;免疫器官重量和血清溶血素生成.结果显示体内给药的DTC可以显著增强DNFB所致小鼠迟发型超敏反应,显著增加小白鼠胸腺和脾脏的重量,高剂量时显著增强小鼠血清溶血素的生成.能显著增强小鼠的碳廓清除率.说明:DTC可增强环磷酰胺致免疫低下小鼠的免疫功能.
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肝病患者红细胞膜抗溶性增强对白细胞检测的干扰及其纠正
目的 探讨肝病患者红细胞膜抗溶性增强对白细胞检测的干扰及其纠正措施。方法 应用Sysmex SE-9000全自动血液分析仪和F-800半自动血液分析仪，对48例肝病患者进行对比分析，并采取加过量溶血素的办法，来消除红细胞的残留，以确保白细胞计数的准确性。结果 肝病患者红细胞膜抗溶性增强对F-800半自动血液分析仪检测白细胞存在正向干扰。增加溶血素用量可有效消除红细胞的残留。结论 使用F-800等半自动血液分析仪对肝病患者白细胞计数，应适当增加溶血素用量，以消除红细胞残留对白细胞计数的影响。
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试剂质量对血细胞分析的影响因素探讨
很多文章报导了抗溶血红细胞、有核红细胞和聚集的血小板对白细胞计数的干扰,小红细胞、红细胞碎片、血小板聚集、EDTA-K2依赖型聚集对血小板计数的干扰作,但试剂质量对血细胞分析的影响鲜有描述.
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盐酸左旋咪唑对免疫功能低下小鼠免疫功能的影响
目的 研究酸左旋咪唑对免疫功能低下小鼠免疫功能的影响.方法 采用环磷酰胺制备免疫功能低下小鼠模型,分别给予5,10,15 mg/kg盐酸左旋咪唑治疗15 d,以血清IgG含量、胸腺和脾脏指数、单核巨噬细胞吞噬能力、迟发型超敏反应OD值及血清溶血素OD值为考察指标,同时采用胸腺肽为阳性对照,全面考察盐酸左旋咪唑对免疫功能低下小鼠免疫功能的影响.结果 模型组血清IgG含量、胸腺和脾脏指数及K值和α值降低(P<0.05),胸腺肽组及盐酸左旋咪唑5,10,15 mg/kg组各指标均提高(P<0.05).模型组迟发型超敏反应OD值和血清溶血素OD值降低(P<0.05),胸腺肽组及盐酸左旋咪唑5,10,15 mg/kg组各指标均提高(P<0.05).结论 盐酸左旋咪唑可提高免疫低下小鼠的免疫能力.
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轻亮胶囊的抗辐射作用研究
[目的]探讨轻亮胶囊对小鼠的抗辐射保护作用.[方法]用KM种小鼠连续14 d给予0.35、0.70和1.40 g/kg(分别相当于推荐人用量的5倍、10倍和20倍)轻亮胶囊灌胃,经3Gy <'60>Co-r射线辐照后,继续给予受试物至17～28d.检测小鼠的外周血及骨髓.[结果]受试物高剂量组能够明显对抗并减轻外周血白细胞数的减少(辐照3 d升高57.1%;辐照14 d升高61.1%)、骨髓有核细胞数的减少(抑制率由42.5%减少到22.8%)、微核细胞数的增多(抑制率为22.6%)和血清溶血素水平的降低(增加率31.6%).[结论]轻亮胶囊具有抗辐射作用.
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肠溶血素实验与产志贺氏毒素大肠菌其他检测方法的对比研究
目前应用的免疫磁珠分离法(IMS)、科玛嘉O157色选择琼脂和山梨醇麦康凯琼脂,均为O157特异性选择性试剂和方法.肠溶血素为已知产志贺氏毒素大肠菌(STEC)相关毒性因子之一[1] ,检测菌株肠溶血素的洗绵羊血琼脂平板,可筛查O157 STEC,也可筛查非O157血清型STEC大肠菌,如O26、O103、O111、O145[2],且不需特殊实验条件,适合一般实验室使用.为证实该法在河南省的使用价值,于2000年应用该方法检测了河南省在O157大肠菌疫区分离到的疑似O157大肠菌株142株.
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春血康对免疫功能影响的实验研究
目的:探讨春血康对小鼠免疫功能的影响.方法:①用重量法观察春血康对免疫器官(脾脏和胸腺)重量的影响;②用MTT法观察春血康对ConA(刀豆蛋白)所致T淋巴细胞增殖的影响;用中性红染色法观察春血康对单核-巨噬细胞活性的影响;③用比色法观察春血康对血清中溶血素含量的影响;④用MTT法观察春血康对NK细胞活性的影响.结果:春血康可对抗环磷酰胺(cy)所致免疫器官重量减轻、T淋巴细胞增殖能力的降低、单核-巨噬细胞活性降低、血清中溶血素含量减少、NK细胞活性降低.结论:春血康可提高实验小鼠的免疫功能.
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CA570血细胞分析仪常见故障的排除方法
CA570血细胞分析仪是一种先进的处理器控制的自动血液分析仪,操作者通过菜单选择所需操作项.如界标设定、定标、清洁等.处置三个试剂容器,分别盛装稀释液,溶血素,清洁剂.
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白芷四黄散治疗急性蜂窝织炎43例
急性蜂窝织炎是指疏松结缔组织的急性感染,可发生在皮下、筋膜下、肌间隙或深部蜂窝组织.本病是皮下疏松结缔组织的急性细菌感染,致病菌为溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌以及大肠杆菌或其他型链球菌.由于受侵组织质地较疏松,病菌释放毒性强的溶血素、链激酶、透明质酸酶等,可使病变扩展较快,病变附近淋巴结常可侵及,可有明显的毒血症[1].本病属于中医"痈"、"发"的范畴.临床表现以皮肤疏松部位突然红肿蔓延成片,灼热疼痛为主要特点.笔者应用白芷四黄散敷贴患处43例,收到了满意的临床效果,现报告如下.
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低聚甘露糖醛酸免疫调节作用实验研究
目的 研究低聚甘露糖醛酸对小鼠免疫功能的影响.方法 利用MTT法测定低聚甘露糖醛酸对脾细胞增殖的作用,对刀豆蛋白A(ConA)和脂多糖(LPS)所致的小鼠脾淋巴细胞增殖的影响；利用中性红法测定低聚甘露糖醛酸对巨噬细胞吞噬活性的影响；采用血清溶血素法测定低聚甘露糖醛酸对鸡红细胞所致的小鼠溶血素抗体生成的影响.同时观察了低聚甘露糖醛酸对小鼠体重,以及胸腺指数和脾脏指数的作用.结果 低聚甘露糖醛酸能促进脾细胞增殖,促进ConA和LPS所致的脾淋巴细胞增殖,提高巨噬细胞的吞噬功能,提高小鼠血清溶血素含量,提高小鼠的脾脏指数.结论 低聚甘露糖醛酸具有显著的免疫调节作用.
