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混合型尿素酶抑制剂3-羟基-3-(2-羟基-5-氯苯基)丙酰氧肟酸动力学常数测定方法研究
探讨尿素酶抑制剂3-羟基-3-(2-羟基-5-氯苯基)丙酰氧肟酸动力学常数测定的影响因素,测定其混合型抑制的非竞争属性动力学常数K'.通过合理选取尿素浓度来消除其反馈抑制的干扰,并通过采用酶动力学方程直接对反应速率与底物浓度的V-[S]图进行非线性拟合的方法,来测定混合型尿素酶抑制剂的动力学常数K'.结果表明,选用适宜的底物浓度可以使基于线性拟合的双倒数曲线更好的相交于一点,虽然能有效的提高求取(混合型抑制的竞争属性动力学常数)K的精度,但不能求取K';相反,基于酶动力学方程,对相同的实验数据以反应速度V对尿素浓度[S]进行非线性拟合,能有效的同时确定混合型抑制的动力学常数Ki和K'.
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Biacore法测定重组人乳头瘤病毒双价(16/18型)疫苗原液的动力学常数
目的:建立Biacore法测定重组人乳头瘤病毒双价(16/18型)疫苗原液的动力学常数.方法:分别将HPV 16·V5中和单抗与HPV 18·J4中和单抗偶联到CM5芯片上,然后根据Biacore X-100 Kinetics/Affinity控制软件将HPV 16L1和HPV18L1原液分别稀释至适当的不同浓度,采用50 mmol·L-1氢氧化钠溶液作为再生液进行动力学分析.根据Biacore X-100Evaluation分析软件进行拟合,得到样品的动力学常数KD值.结果:Biacore法测定重组人乳头瘤病毒16型、18型原液动力学常数KD分别为4.844 × 10-10 mol·L-1和1.67 × 10-10 mol·L-1,HPV 16L1和HPV 18L1原液在浓度为0.625～40 μg· mL-1时线性关系良好(HPV16L1:Y=17.77X-0.0184,r=1.000;HPV 18L1:Y=18.73X+5.282,r=0.9957).HPV 16L1和HPV18L1原液精密度和稳定性试验的RSD均＜20％.并且Biacore法测定的结合常数ka值和体外相对效力测定(IVRP法)的EC50值之间具有一定的相关性.结论:该方法实时、简便、快速、准确、灵敏,适用于重组人乳头瘤病毒原液的动力学分析.
