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复合诱变法选育普那霉素高产菌株
以始旋链霉菌(Streptomyces pristinaespiralis)ZP2为出发菌株,经紫外线(UV)、亚硝基胍(NTG)复合诱变,并结合普那霉素抗性突变株的理化筛选,选育到一株高产突变菌株UN2056,其普那霉素产量达到1490 mg/L,比出发菌株提高了45.7%.传代试验表明该高产突变菌株的高产性能遗传特性稳定.高产突变株UN2056在5 L发酵罐中进行发酵试验,其平均发酵产量达到1645 mg/L,比出发菌株提高了60.8%.
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普那霉素产生菌的推理选育
根据普那霉素的生物合成途径对普那霉素产生菌始旋链霉菌进行推理选育,原始出发菌株Streptomyces pristinaespiralis ATCC25486经过12次单菌落分离,其间经历5次UV诱变并分别筛选0.1%AAr突变株、0.3%AAr突变株、0.1%VHr突变株、200u/ml KTMr突变株、0.1%DOGr突变株,获得了突变株5.p,ristinaespiralis 12-55,其生产能力较原始出发菌株S.pristinaespiralis ATCC25486提高了100倍,达到3000u/ml.传代试验表明普那霉素高产突变株S.pristinaespiralis 12-55的高产性能遗传特性稳定.
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spy1的DNA改组提高普那霉素的产量
目的 研究普那霉素产生菌株选育的分子育种方法,提高普那霉素的产量.方法 对来自6种始旋链霉菌基因组重排菌株的spy1调控基因,进行DNA改组研究,然后筛选阳性接合子进行发酵,HPLC法测定普那霉素两组分的产量变化.结果 建立了普那霉素生物合成调控基因spy1的改组基因库,筛选出71个spy1改组接合子.接合子的普那霉素Ⅰ产量都有了不同程度的提高,高产量为出发菌株7.5倍,达60mg/L;普那霉素Ⅱ产量则没有显著变化.结论 利用DNA改组技术进行调控基因的分子进化可以有效提高抗生素的产量,为普那霉素分子育种研究中的首次尝试.
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始旋链霉菌HCCB10218产生的诺卡胺类物质的发现
目的 鉴定从始旋链霉菌中发现的诺卡胺类物质.方法 利用超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS)技术,结合二级质谱解析、数据库检索等多种手段分析和鉴定始旋链霉菌HCCB 10218菌株发酵产生的诺卡胺类产物,并通过生物信息学分析解析其生物合成途径.结果 在始旋链霉菌HCCB 10218的发酵提取物中发现了4个诺卡胺类物质(A～D),其中化合物B为新化合物.结论 诺卡胺类物质是首次在始旋链霉菌中发现.该结果丰富了放线菌活性代谢产物的多样性,同时补充了诺卡胺类物质的生物合成途径.
关键词： 始旋链霉菌 超高效液相色谱-质谱联用技术 诺卡胺 -
始旋链霉菌HCCB2003-8 snaA、snaB和snaC基因的克隆、序列分析及原核表达
以始旋链霉菌(Streptomyces pristinaespiralis)HCCB2003-8的染色体DNA为模板,通过优化PCR条件扩增出FMN还原酶、PⅡA合酶的基因片段.与文献报道的基因序列做同源比较,snaA和snaB碱基序列分别只有一个碱基的差异,snaC碱基序列完全匹配.将snaA、snaB和snaC的基因片段插入原核表达载体pET30a中,并转化至大肠埃希菌BL21(DE3).SDS-PAGE结果表明,经IPTG诱导后基因分别得到表达.
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补加葡萄糖对始旋链霉菌发酵生产普那霉素的影响
在摇瓶及5 L发酵罐中研究了补加葡萄糖对始旋链霉菌(Streptomyces pristinaespiralis)XC 416发酵生产普那霉素的影响.摇瓶发酵结果表明,初始葡萄糖浓度以40 g/L为宜.通过在对数生长期补加20 g/L的葡萄糖可以使生物量增加23%～31%,普那霉素的产量可以提高20%～36%;在稳定期补加20 g/L的葡萄糖虽然对生物量影响不大,但能显著提高菌体合成抗生素的能力,使普那霉紊的产量提高56%～76%;而在对数生长期中后期和稳定期前期分两次各补加10 g/L的葡萄糖,则能使普那霉素的产量提高1.92倍.5L发酵罐补料分批发酵结果表明,在对数生长期和抗生素合成的初期分三次共流加36 g/L葡萄糖不仅有效地延长了抗生素的合成期,还提高了菌体合成抗生素的能力及产物得率,终使普那霉索的产量提高1.02倍.
关键词： 普那霉素 始旋链霉菌 葡萄糖 分批发酵 补料分批发酵文献标示码:A
