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青霉素高产菌株的选育
采用紫外线与2-去氧-D-葡萄糖复合诱变的方法,选育青霉素高产菌株,使发酵效价与总产量分别提高了12.2%和10.9%.
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UV+ARTP复合诱变筛选子囊霉素高产菌株
采用紫外(UV)与常压室温等离子体(ARTP)复合诱变技术对子囊霉素产生菌吸水链霉菌Streptomyces hygroscopicus进行诱变处理,结合摇瓶发酵初筛和复筛,以HPLC法检测子囊霉素的含量,结果获得1株遗传性状良好的子囊霉素高产菌株S.hygroscopicus FIM-38-24,其产子囊霉素能力较出发菌株提高4倍以上,发酵单位达568.0 μg/ml.
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糖肽类抗生素A40926高产菌株的选育
糖肽类抗生素A40926产生菌YT-B2126经紫外线和甲磺酸乙酯复合诱变处理,结合抗生素抗性筛选,获得一株高产菌株YT-B2126-G 11,其A40926 B0组分摇瓶发酵单位为1.2 g/L,较出发菌株提高了93％,且遗传稳定性良好.在500 L发酵罐上,A40926 B0组分的发酵单位达到1.1 g/L.
关键词： 糖肽类抗生素A40926 复合诱变 发酵 -
多因素复合诱变选育克拉维酸高产菌株
采用多因素连续复合诱变的方法,对克拉维酸产生菌带小棒链霉菌(Streptomyces clavuligerus)进行系列诱变,以抗生素抗性作为理性筛选标记,从含青霉素35 μg/ml的琼脂平板上筛选到青霉素抗性突变株YT-201-57#,在摇瓶实验中,对青霉素的抗性由8μg/ml提高到45 μg/ml,克拉维酸产景较出发菌株提高10.3%,且高产遗传特性经5次传代仍稳定.
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紫杉醇产生菌美丽镰刀霉K1781的诱变育种
采用紫外线与亚硝酸对美丽镰刀霉(Fusarium mairei)K178的孢子进行复合诱变,于含40μg/ml制霉菌素的平板上进行筛选,获得31株突变株,其中5株的紫杉醇摇瓶发酵产量高于出发菌株,突变株UH23的紫杉醇产量为259.8μg/L,进一步优化其发酵工艺条件,紫杉醇产量达286.4pg/L,较出发菌株提高了29.9%.
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麦考酚酸高产菌株的选育
以短密青霉MA-4为出发菌株,应用紫外和亚硝基胍诱变,结合麦考酚酸与三氟乙酸抗性筛选,获得高产、稳定的突变株MA-H8.经过发酵培养基优化,突变株发酵水平为4500μg/ml.
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复合诱变和抗性筛选高产谷胱甘肽酵母菌株
对75株酵母菌经初筛、复筛和单倍体分离,得到胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量较高的单倍体酵母菌株S1(a),并进行遗传标记.经硫酸二乙酯诱变、紫外诱变及两者的复合诱变,ZnCl2、乙硫氨酸抗性交替筛选得GSH含量较高的单倍体F4(a,Arg-,ZnCl2r,Ethr),GSH含量与产量分别比出发单倍体提高了73.5%和118.1%.
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复合诱变法选育普那霉素高产菌株
以始旋链霉菌(Streptomyces pristinaespiralis)ZP2为出发菌株,经紫外线(UV)、亚硝基胍(NTG)复合诱变,并结合普那霉素抗性突变株的理化筛选,选育到一株高产突变菌株UN2056,其普那霉素产量达到1490 mg/L,比出发菌株提高了45.7%.传代试验表明该高产突变菌株的高产性能遗传特性稳定.高产突变株UN2056在5 L发酵罐中进行发酵试验,其平均发酵产量达到1645 mg/L,比出发菌株提高了60.8%.
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复合诱变选育乳链菌肤高产菌株
目的 选育乳桩菌肽高产菌株.方法 以乳酸链球菌ATCC11454为出发菌株,采用紫外线、微波和亚硝酸钠对其进行复合诱变处理,并结合乳链菌肽抗性筛选选育出高产乳健菌肽的菌株.结果 通过选育获得一株乳健菌肽的高产菌株Nis-123,乳链菌肽产量为5 250 U/mL,校出发菌株提高了4.3倍.传代实验证明该菌株遗传性稳定.结论 紫外线、微波和亚硝酸钠复合诱变结合乳链菌肽抗性选育可以提高乳酸链球菌的产肽能力.
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复合诱变选育星形孢菌素产生菌
目的 提高蛋白激酶C抑制剂星形孢菌素产生菌株的发酵效价.方法 以海洋来源的链霉菌Strepto-myces fradiae 007、S.arenae Z4007和S.rubrolavendulae THW-12为出发菌株.采用紫外线照射和亚硝基胍复合诱变,结合HPLC进行筛选.结果 从菌株Streptomyces radiae 007中得到一株高产突变株,发酵效价由原来的1.02 μg.mL-1提高到9.06 μg.mL-1,提高了8倍,突变株性状稳定.结论 复合诱变是一种简便有效的提高菌株发酵效价的方法.
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半导体激光和紫外线对辅酶Q10产生菌的复合诱变效应
目的 选育辅酶Q10(CoQ10)高产菌株.方法 采用紫外线、半导体激光及紫外线与半导体激光复合作用的方法,诱变产CoQ10红酵母菌sY-3,以提高CoQ10的产量.结果 紫外线和半导体激光单独作用,诱变效果不佳;二者合用的效果却很好.用紫外照射120 s,再经半导体激光辐射8 min,得到一株叠氮钠和维生素K3双抗性突变株,产辅CoQ10的量达到157.7nag·L-1,比原始菌株提高了88.1%,并具有良好的遗传稳定性.结论 所建方法简便可行.
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耐磷酸盐土霉素菌株选育和发酵的研究
以土霉素生产菌种酸盐的培养基定向筛选,得到高产突变菌株100#.该突变株遗传特性稳定,代谢特性优于出发菌株,经57m3发酵罐生产验证,生产稳定,低效价罐批减少59.5%,在磷酸盐浓度提高到0.04%～0.05%时,统计一年的正常罐批平均发酵效价比对照菌株提高5.76%.
关键词： 土霉素产生菌龟裂链霉菌 复合诱变 磷酸盐 发酵水平 -
核糖体工程技术选育米尔贝霉素高产菌株
本实验室中保存的一株从土壤中分离得到的米尔贝链霉菌(Streptomyces milbemycinicus)27号菌株所产米尔贝霉素A3和A4的初始产量分别为61.0和23.8μg/mL.以该菌株为出发菌株,采用核糖体工程技术,结合紫外诱变技术,对米尔贝霉素产生菌米尔贝链霉菌进行诱变,并以链霉素耐受为筛选压力进行筛选.经过诱变后对单菌落进行摇瓶复筛,其中正突变株中米尔贝霉素产量高的菌株编号是R2-6-5,其米尔贝霉素A3和A4的产量分别是105.2和38.8μg/mL,较原始菌株分别提高了72.5％和63.3％,且遗传稳定.后,对产量变化较大的11株突变株基因组中rsmG基因和rspL基因进行突变位点分析,发现在rspL基因内均未发生突变,rsmG基因均发生突变.本研究表明,链霉素抗性降低的突变菌株确实都在相关基因内发生突变,且核糖体工程结合紫外诱变的诱变方式效果良好,能够快速有效的提高米尔贝链霉菌生物合成米尔贝霉素的能力.
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新型常压室温等离子体-紫外复合诱变选育埃莎霉素Ⅰ高产菌株
目的 通过对埃莎霉素Ⅰ产生菌WSJ-IA进行诱变选育研究,以期获得埃莎霉素Ⅰ高产菌株.方法 使用多功能等离子体诱变系统(multifunctional plasma mutagenesis system,MPMS)对出发菌株的孢子进行等离子体和紫外复合诱变,设定不同的诱变时间处理孢子悬液,通过致死率确定合适的诱变条件,利用突变株摇瓶发酵效价筛选出正突变菌株.结果 在MPMS射频功率为100W,处理距离5mm,气体流量12.5SLM,等离子体-紫外辐射时间为50s时,菌株致死率为96.08％.在此诱变条件下,以突变株的初筛效价为指标的突变率、正突变率分别达到63.96％和22.52％,复筛效价是出发菌株1.5倍以上的有5株,占复筛菌株的9％.终筛选出一株发酵单位比出发菌株提高221％、埃莎霉素Ⅰ组分含量提高192％的正突变株IA-425.42L自动发酵罐发酵结果表明,该菌株埃莎霉素Ⅰ产量达到(2000±200) μg/mL左右.结论 新型等离子体复合紫外诱变方式,可有效提高菌株的埃莎霉素Ⅰ发酵产量和组分含量.这为埃莎霉素Ⅰ的大规模发酵和临床前研究奠定了良好基础.
关键词： 埃莎霉素Ⅰ 多功能等离子体诱变系统 复合诱变 选育 -
常压室温等离子体及紫外复合诱变选育达托霉素高产菌株
目的 通过对达托霉素产生菌进行诱变选育研究,以期获得达托霉素高产菌株.方法 采用常压室温等离子体诱变育种技术,结合紫外诱变技术对达托霉素产生菌玫瑰孢链霉菌进行复合诱变,并以谷氨酸钠耐受为选择压力进行理性筛选.结果 经诱变选育获得一株达托霉素产量达到3.9g/L的突变株Q12-63#,发酵单位较出发菌株提高了37％.结论 常压室温等离子体及紫外复合诱变方式,结合谷氨酸钠耐受性筛选模型,达托霉素产生菌正突变几率高,可有效提高菌株的达托霉素产量.
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Pneumocandin B0高产菌株选育
目的 筛选获得pneumocandin B0高产菌株.方法 以pneumocandin B0产生菌PB22-79作为出发菌株,采用微波诱变方法处理,然后利用He-Ne激光复合制霉菌素抗性筛选菌种,以菌种发酵液效价作为筛选指标.结果 获得一株高产突变株FH-24-135,其摇瓶生产能力比出发菌株提高了56.3％.且遗传特性稳定.研究确定了微波辐射的佳时间为80s,而He-Ne激光复合制霉菌素抗性筛选的佳剂量为90min和25μg/mL(MIC).结论 微波诱变结合He-Ne激光复合制霉菌素抗性筛选方法是筛选pneumocandin B0产生菌的有效方法,有利于提高菌株的发酵水平,为工业化生产奠定基础.
关键词： Pneumocandin B0 复合诱变 He-Ne激光 抗性筛选 -
林可霉素高产菌株的选育
目的 选育出高产稳产的林可霉素生产菌株.方法 以林可霉素产生菌L92为出发菌株,采用氯化锌、紫外线(UV)、硫酸二乙酯(DES)三重复合诱变,再经连续推理选育林可霉素、丙基脯氨酸和α,D-吡喃半乳糖抗性突变株,获得高产菌株L-96.结果 摇瓶发酵单位提高1倍,经百吨罐生产验证,平均放罐效价提高45％.结论 生产能力得到了大幅度提高,传代实验证明该突变株的高产性能遗传稳定.
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采用氯化锂和紫外线复合诱变方法筛选四环素高产菌株
目的筛选优良高产四环素生产菌株,以提高生产发酵水平.方法采用氯化锂和紫外线复合诱变单孢子悬浮液.结果经过初筛、复筛,获得活性提高12.3%～37%的变株.结论氯化锂与紫外线复合诱变四环素产生菌可以获得高产菌株,同时氯化锂的使用对于菌株发酵的终成品质量无任何不良影响.
