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低分子质量牛骨多肽制备及对大鼠破骨细胞的影响
从牛骨制备低分子质量骨多肽,并观察其对大鼠破骨细胞的影响.采用冷冻离心、等电点沉淀方法去除骨胶原,用超滤法得到分子质量10 000u以下的牛骨多肽,并用Sephadex G-10层析脱盐.Tricine-SDS-PAGE对低分子质量牛骨多肽分子质量进行检测,采用抗酒石酸磷酸酶(TRAP)染色法研究牛骨多肽对体外培养大鼠破骨细胞的分化影响,甲苯胺蓝硼酸盐染色法观察对破骨细胞的骨吸收影响以及HE、TRAP、DAPI染色法分别观察凋亡征象.结果:建立和优化了牛骨多肽的制备方法;牛骨多肽对破骨细胞分化无影响,但能抑制其骨吸收功能,促进其凋亡.
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低分子牛骨多肽制备及对大鼠成骨细胞的影响
目的 从牛骨制备低分子多肽,并观察其对体外培养新生大鼠的成骨细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性和Ⅰ型胶原mRNA表达的影响.方法 采用冷冻离心、等电点沉淀方法去除骨胶原,超滤法得到相对分子质量(Mr)10 000以下的牛骨多肽,经Sephadex G-10脱盐,浓缩后用Tricine-SDS-PAGE电泳对Mr进行检测.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定牛骨多肽对成骨细胞增殖的影响,ALP检测试剂盒测定细胞的ALP活性,RT-PCR法检测细胞中Ⅰ型胶原mRNA表达.结果 建立了牛骨多肽的制备方法.低浓度牛骨多肽组与实验对照组相比对成骨细胞的增殖不显著(P＞0.05),高浓度具有显著的增殖作用(P＜0.05),并呈现出剂量依赖性;中、高浓度(50～400μg/mL)牛骨多肽组可提高成骨细胞ALP的活性(P＜0.05),低浓度组(10μg/mL)提高ALP的活性不显著(P＞0.05);牛骨多肽能提高Ⅰ型胶原mRNA表达.结论 牛骨多肽的制备工艺简单,适合规模化生产;牛骨多肽能促进成骨细胞增殖、ALP活性和Ⅰ型胶原mRNA的表达.
