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信号分子抑制剂对乳腺癌细胞抗失巢凋亡特性的影响
为研究肿瘤细胞抗失巢凋亡(anoikis)的分子机理并探讨其干预措施,以粘附非依赖生长的3种乳腺癌细胞系Bcap-37、MCF-7以及MDA-MB-231为研究对象,利用一些与细胞存活相关的信号转导分子的特异性抑制剂,包括HER2抑制剂AG825;PDGF受体抑制剂AG17;p38MAPK抑制剂SB203580;PI3-K抑制剂LY294002;MAPKK(MEK)抑制剂PD98059以及广谱蛋白酪氨酸激酶抑制剂genistein,通过DNA ladder分析,软琼脂集落形成实验以及流式细胞术分析等方法检测了这些抑制剂对3种乳腺癌细胞抗失巢凋亡特性的影响.研究结果显示,几种抑制剂在短时间(24h)内对悬浮生长的乳腺癌细胞无明显的诱导凋亡作用,表现为琼脂糖凝胶电泳未检测到DNAladder,流式细胞术检测无凋亡峰出现.而在软琼脂集落形成实验中,Genistein可完全抑制3种乳腺癌细胞在软琼脂中形成集落.AG17对3种细胞在软琼脂中形成集落的能力同样具有明显的抑制作用,PD98059则可部分抑制MDA-MB-231在软琼脂中的生长.
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白藜芦醇通过下调survivin蛋白表达促进人卵巢癌A2780细胞失巢凋亡的研究
目的:初步探讨人卵巢癌A2780细胞抗失巢凋亡的特性及白藜芦醇(RES)对人卵巢癌A2780细胞失巢凋亡的作用及相关机制.方法:利用悬浮培养模型体外模拟人卵巢癌A2780细胞失巢培养,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡；利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,免疫印迹实验(Western blot)检测生存素(survivin)蛋白表达的情况.结果:悬浮培养A2780细胞凋亡率与正常贴壁培养细胞凋亡率相比[(3.19±1.63)％vs(3.51±1.33)％],差异无统计学意义(P＞0.05)；而悬浮培养组细胞survivin蛋白表达明显增高.RES处理后呈时间、剂量依赖性抑制悬浮培养A2780细胞增殖.RES处理组细胞凋亡率(58.71±6.78)％明显高于悬浮培养组细胞凋亡率(3.19±1.63)％(P＜0.01),且RES处理组细胞survivin蛋白水平明显下降.结论:人卵巢癌A2780细胞具有抗失巢凋亡的特性.RES能诱导人卵巢癌A2780细胞失巢凋亡,其效应与survivin蛋白表达下调有关.
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肺腺癌A549细胞抗失巢凋亡相关基因的确认及C8orf4基因的表达
目的:比较抗失巢凋亡及正常贴壁生长肺腺癌A549细胞基因组表达差异,从中筛选肺癌抗失巢凋亡相关基因,并探讨C8orf4基因的高表达及其对失巢凋亡的正性调剂作用意义.方法:建立抗失巢凋亡肺癌A549细胞系;用基因芯片技术检测其与正常贴壁生长A549细胞的差异基因,利用NCBI Pubmed数据库筛选出肺癌细胞抗失巢凋亡相关的基因,找出差异表达倍数大的基因,运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术及蛋白质印迹技术测定其表达.结果:共检测到表达差异的基因745个,筛选出63个与肺癌细胞抗失巢凋亡相关的基因,C8orf4基因差异表达倍数大,在脱落培养A549细胞中C8orF4基因及其编码蛋白表达明显高于贴壁培养A549细胞,P<0.02.结论:基因芯片技术为筛选肺癌抗失巢凋亡相关基因提供了有效方法,C8ORF4基因可能参与调控肺癌细胞抗失巢凋亡过程.
