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产海因酶和水解酶菌的假单胞杆菌的性质研究
为了进一步了解假单胞杆菌spMF0507(学名[1]:Pseudomgnas spMF0507)产海因酶和水解酶的性质,通过对菌种spMF0507进行发酵,借助高压液相测得不同条件下菌种spMF0507产两种酶的活力.结果表明,菌种的接种龄在20～24 h,初始培养的适合温度为30℃,pH为7.0;在双酶进行转化底物时,观察到在温度55℃海因酶活力达到1.88 U/ml,在pH 9.0海因酶活力仍有0.983 U/ml,水解酶没活力,从而说明海因酶在高温、高pH下是稳定的,而水解酶则是敏感的.
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假单胞菌海因酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
目的：构建海因酶基因工程菌，以便实现对羟基苯甘氨酸的工业化生产。方法：利用PCR技术从恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida） 9801中扩增得到海因酶基因，将该基因插入pMD18-T质粒，转化大肠杆菌（Escherichia coli），通过地高辛标记原位杂交和海因酶活力测定两种方法，筛选出具有海因酶活力的阳性转化子。结果：工程菌E.coli BL21/pMD-dht的海因酶活力达到1700 U/L，比野生菌恶臭假单胞9801菌的酶活力提高8倍。SDS-PAGE显示海因酶的单体分子量约为53 KDa，海因酶的表达量约占菌体总可溶性蛋白的20%。结论：构建的海因酶基因工程菌已初步具有工业化应用价值。
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浅淡海因酶法制备D-型氨基酸
海因酶是具有重要应用价值的工业酶,被广泛应用于生产具光学活性的D -型氨基酸.就海因酶催化特质、反应机理及海固酶在D-型氨基酸合成中的应用作综述.
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海因酶产生菌的微孔快速筛选法
目的建立微孔快速筛选法以筛选海因酶活力较高的菌株.方法比较底物对羟基苯海因的多种有机溶剂对酶反应的影响.结果筛选出一株酶活力较高的海因酶产生菌腐臭假单胞菌9505(Pseudomonas putida 9505).发现吐温-80(1%)能很好溶解底物,促进酶反应.结论为从大批量菌株中快速筛选出较高酶活力的菌株提供了一种新的方法.较好地解决了酶反应体系中底物不易溶解的关键性问题.
