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rIL-24文献资料
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非融合rIL-24蛋白的制备及活性鉴定
目的 制备非融合的rIL-24蛋白,鉴定其体外诱导肿瘤细胞凋亡活性.方法 为制备非融合IL-24蛋白,将IL-24基因插入到pET32a(+)上KpnⅠ与BamHⅠ之间,构建表达载体IL-24/pET32a,IPTG诱导在E.coli BL21(DE3)中表达.洗涤后的包涵体溶解在2 mol/L 尿素(pH 9.0)中,采用镍离子亲和色谱和凝胶分子筛的二步法纯化,肠激酶酶切(肠激酶与蛋白1:400,pH 7.5处理36 h),再用亲和柱色谱纯化制备非融合的rIL-24.MTT法和形态学观察分析rIL-24体外诱导肿瘤细胞凋亡的活性.结果 重组工程菌以包涵体形式表达出相对分子质量约为35 000的融合蛋白.包涵体经洗涤、溶解及二步纯化得到纯度大于95%的Trx-IL-24.融合蛋白用肠激酶酶切之后,经亲和色谱制备得到纯度大于98%的非融合蛋白rIL-24.rIL-24显著诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡(P<0.05),而对正常人肺成纤维细胞NHLF没有影响.结论 IL-24基因在E.coli中高效表达,并获得高纯度、在体外明显诱导乳腺癌细胞凋亡的非融合蛋白rIL-24,预示其具有肿瘤治疗应用的前景.
