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阿维拉霉素高产菌株的选育
目的 诱变选育阿维拉霉素高产菌株. 方法 紫外线随机诱变结合阿维拉霉素、2-氧-D-葡萄糖和高浓度CaCl2抗性筛选的推理选育方案. 结果 通过选育获得了抗CaCl2的高产菌株Avl-104,其阿维拉霉素产量为800ms/L,产量较出发菌株提高了217.4%.稳定性研究发现Avl-104具有遗传不稳定的特性,菌种高产特性退化严重,但通过自然分纯的方法,得到菌株Avl-104-312,其阿维拉霉素产量达1 222 mg/L. 结论 紫外随机诱变结合高浓度CaCl2抗性推理选育辅以自然分纯可以提高阿维拉霉素的产素能力.利用阿维拉霉素高产菌株的遗传不稳定性,通过自然分纯,不但可以维持其原有的高产特性,也可以进一步提高高产菌株的产素能力.
关键词： 阿维拉霉素 选育 绿色产色链霉菌 氯化钙 2-脱氧-D-葡萄糖 -
原生质体ARTP诱变选育阿维拉霉素高产菌株
目的 筛选获得阿维拉霉素A含量高的菌株,进一步提高绿色产色链霉菌(Streptomyces viridochromogene)发酵阿维拉霉素的水平.方法 对绿色产色链霉菌AVL4(S.viridochromogene AVL4)菌株原生质体制备及再生条件进行了优化,并在此基础上,采用ARTP诱变系统对其原生质体进行了诱变研究.结果 S.viridochromogene AVL4原生质体制备和再生的佳条件为:以活化斜面转接至种子摇瓶培养24h的菌丝体为出发菌丝体,以SMM溶液作为渗透压稳定剂,采用12mg/mL的溶壁酶,30℃酶解反应60min.以原生质体为诱变对象,ARTP处理40s后的菌株经菌落形态初筛和摇瓶发酵复筛,获得一株编号S251的菌株,其摇瓶发酵阿维拉霉素的生物效价较出发菌株提高19.3％,其中,阿维拉霉素A占组分含量81％,较原始出发菌株AVL4含量提高6.4％,而且斜面连续转接五代遗传相对稳定.另外,成功实现变株S251的50L罐发酵验证,其产素水平高达到4500U/mL,较对照菌株AVL4提高27.4％.结论 ARTP处理AVL4菌株原生质体,能够有效提高绿色产色链霉菌产阿维拉霉素的能力,获得的变株S251具有非常好的生产阿维拉霉素的工业化应用潜力.
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常压室温等离子体诱变绿色产色链霉菌及阿维拉霉素高产菌选育
目的 筛选获得阿维拉霉素高产菌株.方法 对一株绿色产色链霉菌实施常压室温等离子体诱变,以中间产物类似物氨基丁酸和高浓度的CaCl2为筛选因子,结合统计学分析,通过琼脂块移接法初筛和管碟法复筛.结果 获得一株高产阿维拉霉素的绿色产色链霉菌D60-9-20,经摇瓶发酵后,HPLC检测发酵液中阿维拉霉素产量达到545mg/L,较出发菌株产量提高了232％,并具有稳定的遗传性能.结论 常压室温等离子体诱变能有效提高绿色产色链霉菌产阿维拉霉素的能力,得到的绿色产色链霉菌菌株D60-9-20具有生产阿维拉霉素的潜在应用价值.
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阿维拉霉素高产菌株绿色产色链霉菌A11-13的推理选育
目的 对绿色产色链霉菌阿维拉霉素高产菌株进行推理选育.方法 采用60Co γ射线诱变、NTG诱变等手段,以阿维拉霉素、链霉素、2-脱氧-D-葡萄糖和α-氨基丁酸抗性为筛选压力,得到3株较高产突变菌株#1316、#1317、#1319;并以此为亲本,进行基因组重排筛选.通过扫描电镜等方法对高产突变株A11-13的菌落、孢子丝、分生孢子的分化特征和生长特性进行了研究,并进行50L发酵罐上发酵试验及发酵产物的验证.结果 得到一株阿维拉霉素高产菌株A11-13,发酵单位达到1318.7mg/L,是原始菌株A-05和突变株#1317产率的202.9倍和9.18倍.50L发酵罐上试验中阿维拉霉菌发酵单位达到1773.9mg/L.该菌株气生菌丝较为粗壮,表面光滑,且孢子量很多,孢子为直径约0.7μm×1.5μm的长椭圆形,与出发菌株存在明显区别.结论 菌株A11-13表现出较高的工业应用潜力.抗生素发酵中形态特征与产率高低有一定的关联性.
