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EB病毒编码的BARF1基因通过JNK/c-Jun信号通路调节鼻咽癌细胞bcl-2的表达
目的:探讨EB病毒编码的BARF1基因对鼻咽癌细胞JNK/c-Jun信号通路活性及bcl-2表达的影响.方法:以pSG5空载体转染鼻咽癌细胞系CNE1(CNE1-SG)为对照,采用蛋白质印迹法检测稳定表达BARF1的CNE1细胞(CNE1-BARF1)中JNK/c-Jun通路的活性及BCL-2的表达;经JNK特异性抑制剂SP600125处理后,检测CNE1-BARF1细胞中JNK/c-Jun通路的活性及BCL-2的表达.结果:与CNE1-SG细胞相比,CNE1-BARF1细胞中c-Jun、BCL-2表达以及JNK和c-Jun蛋白的磷酸化水平明显增加(P<0.05).经SP600125处理后,CNE1-BARF1细胞中c-Jun及BCL-2表达明显降低(P<0.05),c-Jun磷酸化水平也降低,但差异无统计学意义(P>0.05).结论:BARF1基因可能通过激活JNK/c-Jun信号通路上调原癌基因bcl-2的表达.
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JNK／c-Jun 信号通路参与介导 EB 病毒编码的BARF1基因上调胃癌细胞 Bcl-2的表达
目的：探讨 EB 病毒编码的 BARF1基因对胃癌细胞 JNK-MAPK 信号通路活性及 Bcl-2基因表达的影响。方法：以 pSG5空载体转染的胃癌细胞系 BGC823（BGC-SG）为对照，采用蛋白质印迹分析稳定表达 BARF1的 BGC823细胞（BGC-BARF1）中，以及采用 JNK-MAPK 的特异性抑制剂 SP600125处理后 JNK 和 c-Jun 蛋白的磷酸化水平以及 c-Jun 和 Bcl-2蛋白的表达。结果：与 BGC-SG 相比，BGC-BARF1细胞中 JNK 和 c-Jun 蛋白的磷酸化水平，以及 c-Jun 和Bcl-2蛋白的表达均显著提高（P ＜0．05）。SP600125处理后，c-Jun 蛋白的磷酸化水平以及 c-Jun 和 Bcl-2蛋白的表达均显著下降。结论：JNK／c-Jun 信号通路参与介导 BARF1上调胃癌细胞中 Bcl-2的表达。
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BARF1基因对鼻咽癌细胞NF-κB信号通路及bcl-2基因表达的影响
目的:探讨EB病毒编码的BARF1基因对鼻咽癌细胞NF-κB信号通路活性及bcl-2基因表达的影响.方法:以pSG5空载体转染鼻咽癌细胞(CNEl-SG)为对照,分别采用荧光抗体染色法和蛋白质印迹法检测稳定表达BARF1的鼻咽癌细胞系CNE1(CNEl-BARF1)中NF-κB蛋白的核转位和Bcl-2蛋白的表达变化.结果:与CNE1-SG相比,CNE1-BARF1细胞中发生明显的NF-κB核转位,同时Bcl-2蛋白表达量显著增加(t=3.89,P ＜0.05).采用NF-κB的特异性抑制剂Bay11-7082处理后,NF-κB蛋白的核转位明显减少,同时Bcl-2蛋白表达量显著下降(t=3.13,P＜0.05).结论:BARF1基因通过激活NF-κB信号通路上调鼻咽癌细胞中bcl-2基因的表达.
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EB病毒BARF1基因表达对胃癌细胞株SGC7910生物学行为的影响
目的:了解EB病毒BARF1基因表达对胃癌细胞生物学行为的影响.方法:构建pSG5/BARF1真核表达载体,转染到EB病毒阴性的胃癌细胞系SGC7901,经RT-PCR鉴定,获得BARF1稳定表达的细胞克隆.以pSG5空载体转染细胞为对照,进行细胞凋亡诱导实验、细胞增殖实验、软琼脂集落形成实验和细胞迁移实验.结果:与对照组相比,BARF1表达细胞组经抗癌药顺铂诱导后的细胞凋亡率显著降低(P<0.01),增殖速度显著加快(P<0.01),软琼脂集落形成率显著提高(P<0.05),细胞迁移能力显著增强(P<0.05).结论:BARF1基因能够全面增强胃癌细胞的肿瘤原性,可能在EB病毒相关胃癌发生与演化的整个过程中起重要作用.
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EB病毒相关胃癌的研究进展
EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)属疱疹病毒科γ亚科,是一种淋巴细胞病毒属的双链DNA病毒,全世界约95％的成人携带此病毒.目前已证实它与多种恶性肿瘤的发展有关,如胃癌、鼻咽癌、传染性单核细胞增多症、伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma,BL)、何杰金氏病、T细胞淋巴瘤等,其中EB病毒感染型胃癌存在广泛的PIK3CA突变、高频率DNA甲基化、JAK2和CD274基因的扩增,但具体的机制尚不清楚.随着分子生物学技术的发展和应用,研究者对EBV感染相关胃癌的发生机制进行了深入研究.本文将针对EB病毒相关胃癌进行详细阐述.
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EB病毒LMP-1、BALF4及BARF1片段的B细胞表位预测
目的:预测EB病毒LMP-1、BALF4及BARF1片段的B细胞表位.方法:采用Protean软件分析EBV的LMP1、BALF4及BARF1三个氨基酸片段的亲水性、表面可能性、抗原指数及其二级结构中的柔性区域,并结合吴玉章的抗原指数预测法预测其B细胞表位.结果:B细胞表位可能位于LMP-1 N端第356-58,2-19,249-314区段,BARF1N端第8-11,18-25,41-49,203-211区段,BALF4N端第385-387,833-845,398-415,427-435,453-458,23-32,466-473,234-250,642-652区段；另外LMP-1第185-223、BARF1第265-272,132-135以及BALF4第827-832区段内或附近也可能存在B细胞表位.结论:用多参数同时预测LMP-1、BALF4及BARF1的B细胞表位,为制备高效的鼻咽癌血清学诊断试剂和表位疫苗奠定了理论基础.
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BARF1表达下调通过活化 caspase 依赖的线粒体通路诱导 EBV 阳性胃癌细胞凋亡
目的：研究BARF1表达下调对EBV阳性胃癌细胞凋亡的影响，以及BARF1基因沉默介导细胞凋亡的分子机制。方法：siRNA和NCsiRNA分别转染NUGC3和SNU719细胞，运用Western blot测定细胞中BARF1、Bcl－2、Bax、细胞色素C、caspase 3和caspase 9的蛋白表达；RT－PCR测定BARF1、Bcl－2和Bax mRNA的表达；台盼蓝染色法测定细胞存活率；Annexin V－FITC／PI染色法和流式细胞仪测定细胞凋亡；细胞凋亡因子抗体芯片分析细胞中凋亡相关蛋白的表达；线粒体膜电位检测试剂盒测定线粒体膜电位；免疫共沉淀检测细胞中Apaf－1和caspase 9的相互作用。结果：与空白对照组和阴性对照组相比， BARF1基因沉默显著诱导NUGC3和SNU719细胞凋亡，而线粒体膜电位显著降低。 BARF1沉默基因能促进促凋亡蛋白的表达并抑制抗凋亡蛋白的表达，Bcl－2／Bax比例显著降低；而caspase抑制剂能抑制由 BARF1基因沉默介导的细胞凋亡。在 siRNA 转染的细胞中， caspase 3和caspase 9蛋白发生裂解，细胞色素C的浓度显著高于阴性对照组，Apaf－1蛋白与caspase 9蛋白在细胞质中能够发生相互作用。结论：BARF1基因沉默通过线粒体途径调节Bcl－2和Bax蛋白的表达进而诱导NUGC3和SNU719细胞凋亡，并呈caspase通路依赖关系。
