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晚期糖基化终产物受体对转化生长因子-β1引起肺泡上皮间充质转化的影响
目的：研究晚期糖基化终产物受体（receptor for advanced glycation end products，RAGE）对转化生长因子-β1（transforming growth factor β1，TGF-β1）引起人肺腺癌 A549细胞上皮间充质转化（epithelial to mesenchymal transition， EMT）的影响。方法：体外培养人肺腺癌 A549细胞，随机分为对照组、TGF-β1组、TGF-β1＋AGE 组、TGF-β1＋AGE ＋sRAGE 组，分别加入 PBS、TGF-β1（5 ng／mL）、TGF-β1（5 ng／mL）＋晚期糖基化终产物（advanced glycation end products， AGE，200μg／mL），TGF-β1（5 ng／mL）＋AGE（200μg／mL）＋可溶性 RAGE （soluble RAGE，sRAGE，25μg／mL）；蛋白质印迹检测各组细胞平滑肌肌动蛋白α（smooth muscle actin-α，α-SMA）、胶原-Ⅰ（Col-Ⅰ）蛋白表达及 c-Jun 氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）和细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinases，ERK）磷酸化水平。结果：与对照组相比，TGF-β1组 A549细胞 RAGE 蛋白表达明显降低（P ＜0．05），α-SMA、Col-Ⅰ蛋白表达明显增多（P ＜0．01），ERK1／2和 JNK 磷酸化水平明显提高（P ＜0．01）；与 TGF-β1组相比，TGF-β1＋AGE 组 Col-Ⅰ，α-SMA 蛋白表达明显减少（P ＜0．05），ERK1／2和 JNK 磷酸化水平明显降低（P ＜0．05）；与 TGF-β1＋AGE 组相比，TGF-β1＋AGE ＋sRAGE 组α-SMA、Col-Ⅰ蛋白表达明显增多（P ＜0．01），且 ERK1／2和 JNK 磷酸化水平提高（P ＜0．01）。结论：RAGE 可抑制 TGF-β1诱导的 A549肺腺癌细胞上皮间充质转化。
关键词： 转化生长因子-β1 晚期糖基化终产物受体 α-平滑肌肌动蛋白 上皮 间充质转化 -
活性氧影响SKOV3细胞间充质转化及其机制研究
目的:探讨活性氧(ROS)对卵巢上皮性癌细胞株SKOV3细胞的间充质转化的影响及其中可能存在的分子机制.方法:①通过采用ROS生成剂大黄素(Emodin)、ROS清除剂二硫苏糖醇(DTT)调节卵巢上皮性癌细胞株SKOV3细胞内ROS水平,采用PCR技术及蛋白印迹法测定3组(Emodin组、DTT组、对照组)细胞中间充质转化标志分子E钙黏蛋白(E-cadherin) mRNA及蛋白的表达,比较细胞株侵袭转移能力.②结合改变活性氧水平,构建缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的化学合成,小干扰RNA(SiRNA)沉默HIF-1α表达(HIF-1α SiRNA组、DTT组、对照组),比较HIF-1αmRNA的表达.③使用赖氨酰氧化酶(LOX)抑制剂β-氨基丙腈(β-APN)抑制LOX表达,观察各组(Emodin组、DTT组、β-APN组、Emodin+ β-APN组、对照组)细胞HIF-1α、LOX、E-cadherin mRNA及蛋白表达.结果:①SKOV3细胞Emodin组ROS水平较对照组明显升高[(164.85±8.93)％vs(97.42±6.47)％,P＜0.01,E-cadherin mRNA及蛋白的表达均较对照组显著降低(P＜0.05),Emodin组的细胞侵袭率高于对照组[(19.48 ±0.49)％ vs(10.74±2.38)％,P＜0.01],而DTT组结果与之相反,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).②HIF-1α SiRNA作用下,HIF-1αSiRNA组的HIF-1αmRNA表达较对照组降低(0.20 ±0.09 vs 0.87 ±0.10,P＜0.05),LOX mRNA表达较对照组降低(0.40±0.08 vs 3.76±0.66,P＜0.05),而E-cadherin mRNA表达较对照组增高(1.01 ±0.15 vs0.30±0.09,P＜0.05).DTT组的效果较HIF-1α SiRNA组更为显著,两组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).③3-APN作用下,[β-APN组的HIF-1α蛋白表达较对照组无明显变化(0.92 ±0.19 vs 0.94±0.09,P＞0.05),LOX蛋白表达较对照组降低(0.35 ±0.11 vs 0.81±0.13,P＜0.05),而E-cadherin蛋白表达较对照组增高(4.65 ±0.90 vs 2.23 ±0.61,P＜0.05).结论:使ROS升高,上调HIF-1α,使LOX过表达,进而下调E-cadherin,ROS可能介导卵巢癌细胞间充质转化,继而发生侵袭转移.
