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伤寒沙门菌virK和mig-14基因在拮抗多黏菌素B杀伤作用中的差异
目的:比较伤寒沙门菌virK和mig-14基因在拮抗多黏菌素B杀伤作用中的差异,探讨两者在拮抗多黏菌素B杀伤作用中的关系.方法:用自杀质粒介导的同源重组方法制备伤寒沙门菌virK缺陷变异株和virK /mig-14双缺陷变异株,在弱酸性环境下对缺陷菌株做多黏菌素B杀伤试验,比较mig-14缺陷株、virK缺陷株和virK/mig-14双缺陷株对多黏菌素B的耐受情况.结果:成功制备伤寒沙门菌virK缺陷变异株和virK /mig-14双缺陷变异株,在弱酸性环境下mig-14缺陷株、virK缺陷株和virK/mig-14双缺陷株对多黏菌素B的耐受情况基本一致.结论:virK在伤寒沙门菌GIFU10007中也发挥对多黏菌素B的拮抗作用,与mig-14对多黏菌素B的拮抗作用有相似效果.
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mig-14对伤寒沙门菌在高渗应激早期基因表达的调节
目的:探查伤寒沙门菌mig-14在高渗应激下对若干基因表达的调节作用.方法:用自杀质粒介导的同源重组方法制备伤寒沙门菌mig-14基因缺陷变异株,用基因芯片分析高渗应激早期野生株和mig-14缺陷株基因表达差异,并对部分结果采用实时荧光定量PCR进行验证.结果:成功制备伤寒沙门菌mig-14缺陷株,高渗应激早期mig-14变异株与野生株相比有77个基因表达下调和72个基因表达上调. 结论:mig-14可能是一种调节基因,主要参与调节细菌的物质和能量代谢.
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多黏菌素B刺激下伤寒沙门菌mig-14基因的表达特性
目的:研究多黏菌素B(polymyxin, PB)刺激下,伤寒沙门菌mig-14基因的表达是否受调节因子Fis、OmpR、IHF、HilD激活.方法:用自杀质粒法分别制备hilD及IHF的α亚基编码基因(himA)和β亚基编码基因(himD)的缺陷株;然后通过实时定量PCR和lacZ融合实验比较PB刺激下mig-14在伤寒沙门菌各缺陷株(himA、himD、hilD、fis、ompR)与野生株中的转录水平差异,筛选出作用于mig-14的调控因子.结果:成功制备伤寒沙门菌himA、himD及hilD缺陷株;在多黏菌素B刺激下,实时定量PCR结果显示fis、ompR、himA、himD及hilD缺陷株中mig-14 mRNA水平明显低于野生株;lacZ融合实验中,fis、ompR、himA、himD及hilD缺陷株Miller Units值明显低于野生株.结论:在多黏菌素B刺激下,调节因子Fis、OmpR、IHF、HilD可激活伤寒沙门菌mig-14表达.
