您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
细胞因子信号抑制蛋白-3基因文献资料
-
SOCS3基因3′端非翻译区荧光素酶报告载体的构建及活性鉴定
目的:研究细胞因子信号抑制蛋白-3(suppressors of cytokine signaling-3,SOCS3)基因3′端非翻译区(3′-untranslated region,3′-UTR)微小RNA(microRNA,miRNA)的调控作用,构建重组SOCS3基因3′-UTR荧光素酶报告载体,并通过荧光素酶活性测定,初步分析可能调控SOCS3基因表达的miRNAs.方法:采用PCR方法从原代培养的小鼠星形胶质细胞基因组DNA中扩增SOCS3基因3′-UTR序列,插入荧光素酶报告载体pGL3-Promoter,获得重组载体pGL3-Promoter/SOCS3;通过Target Scan5.2、RNAhybrid 和FINDTAR3软件预测可能与SOCS3基因3′-UTR结合的miRNAs;将pGL3-Promoter/SOCS3重组质粒和miRNAs共转染HEK 293T细胞,测定SOCS3 3′-UTR荧光素酶的活性.结果:酶切及核酸测序证实,成功构建了SOCS3基因3′-UTR序列的荧光素酶报告重组子;miRNA靶位点预测显示,SOCS3基因可能是miR-203、miR-291a-5p、miR-9、miR-140和miR-130b的作用靶标;与对照组相比,miR-203、miR-291a-5p、miR-140能使SOCS3 3′-UTR荧光素酶的活性显著降低.结论:成功构建了SOCS3 基因3′-UTR荧光素酶报告载体,且miR-203、miR-291a-5p、miR-140可显著降低其荧光素酶的活性.
