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JNK信号通路在TGF-β1诱导肺间质成纤维细胞基质分泌中的作用
目的:探讨C-Jun氨基末端激酶(c-Jun NH2-terminal kinase,JNK)、P38信号通路的激活在转化生长因子β1(TGF-β1)体外诱导人肺间质成纤维细胞基质分泌中的作用及意义.方法:将肺间质成纤维细胞株分为TGF-β1组、TGF-β1+SB203580组、TGF-β1+DMSO组、TGF-β1+SB600125组、正常对照组.采用免疫印迹法(Western blot)测定总JNK(T-JNK)、磷酸化JNK(p*-KNK)、总P38(T-P38)、磷酸化38(p*-P38)、纤维连接蛋白(FN)、层连粘蛋白(LN)水平的表达变化,采用3H-thymidine incorporation(3H-TdR)检测细胞增殖水平.结果:正常体外培养的肺间质成纤维细胞经TGF-β1刺激后p*-JNK水平显著升高,p*-P38蛋白表达无明显变化;FN、LN蛋白表达水平在TGF-β1诱导48 h后表达显著升高,JNK的特异性化学抑制剂SB600125可以减少p*-JNK、FN、LN蛋白表达水平和细胞增殖水平,P38的特异性化学抑制剂SB203580对上述指标表达无影响.结论:JNK信号通路在TGF-β1诱导的肺间质成纤维细胞分泌基质过程中被激活,并且参与TGF-β1诱导的肺间质成纤维细胞分泌基质过程.
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瞬时转染SARS-CoV M基因对大鼠肺成纤维细胞生长特性及生物学功能的影响
目的通过观察转染SARS-CoV M基因的大鼠肺间质成纤维细胞(fibroblast,FB)生长及功能的改变,初步探讨SARS病毒通过肺组织损伤而引发肺纤维化的可能机制和途径.方法碱裂解法扩增纯化质粒,酶消化法分离大鼠肺间质成纤维细胞;采用脂质体介导的方法瞬时转染M基因入FB;采用RT-PCR法和Western blot鉴定转染结果;四唑盐(MTT)比色法和流式细胞技术(FCM)检测转染后的大鼠肺成纤维细胞的生长情况;采用半定量RT-PCR和Realtime PCR检测转染后基质金属蛋白酶-2(MMP-2)基因转录水平的变化.结果与转染空载体的成纤维细胞相比,转染M基因的成纤维细胞在转染48 h时生长明显增强,G0/G1期比例下降,S期比例增高;转染M基因后MMP-2的转录明显增强.结论成功地将携带有M基因的真核表达质粒瞬时转染入大鼠肺间质成纤维细胞,目的基因在肺间质成纤维细胞中表达并具有与SARS-CoV M相似的抗原性;SARS-CoV M蛋白可能促进肺间质成纤维细胞生长;并促进MMP-2的表达.
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矽肺模型大鼠肺间质成纤维细胞MMP-2和MMP-9的表达
目的:探讨肺间质成纤维细胞MMP-2和MMP-9在SiO2致肺纤维化中的表达及意义. 方法: 清洁级Wistar大鼠50只,随机分为对照组和实验组,实验组气管内注射SiO2悬液,对照组代以等剂量生理盐水. 注射后1,3,7,14和28 d分离和提取肺间质成纤维细胞,应用免疫细胞化学和逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法,观察其MMP-2,MMP-9蛋白及其mRNA的动态变化. 结果:①SiO2作用后1 d成纤维细胞MMP-2表达增高,7 d达高峰,为对照组的3.887倍(t=23.667,P<0.001);MMP-9在SiO2作用后1 d表达增高,7 d达对照组的3.103倍(t=11.399,P<0.001);②MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA的转录从SiO2作用后1 d就开始升高. 结论:受SiO2刺激后,肺间质成纤维细胞上调MMP-2和MMP-9的表达,损伤肺泡基底膜,启动肺纤维化的发生.
