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Huh7细胞中边缘群细胞分选及其增殖分裂能力的研究
目的:探讨Huh7细胞中边缘群细胞的分选及边缘群细胞在增殖及分裂能力方面与非边缘群细胞的差异,为肝癌的治疗探索新的思路.方法:采用流式细胞仪分选Huh7细胞中的边缘群细胞和非边缘群细胞,用荧光显微镜观察其胞内Hoechst33342荧光染色强度差异;以半定量RT-PCR测定ABCG2 mRNA表达水平的差异;应用免疫荧光染色检测ABCG2蛋白表达的差异并观察其增殖和不对称分裂能力的差异.结果:非维拉帕米处理组边缘群细胞比例约为2.22%,经维拉帕米阻断后边缘群细胞比例减少至0.74%;边缘群细胞中Hoechst33342的荧光强度明显较非边缘群细胞弱,在边缘群细胞中ABCG2 mRNA表达水平是非边缘群细胞的4.32倍(P<0.01),增殖能力是非边缘群细胞的2.7倍(P<0.01),且边缘群细胞能产生ABCG2(+)和ABCG2(-)子代细胞,而非边缘群细胞只能产生ABCG2(-)子代细胞.结论:Huh7细胞中存在少量边缘群细胞(2.22%),其增殖能力较非边缘群细胞强且具有不对称分裂能力(自我更新和定向分化),具有肿瘤干细胞的特性:因此边缘群细胞分选可以作为肿瘤干细胞分离的一种方法,并且在肿瘤的耐药和进展中具有更重要作用,进一步探讨针对Huh7边缘群细胞生物学行为的研究有望开辟肝癌治疗的新思路.
关键词： 肝癌 边缘群细胞 维拉帕米 Hoechst33342 ABCG2 -
大鼠小肠黏膜边缘群细胞的生物学研究
目的:分离大鼠胎鼠小肠黏膜来源的边缘群(SP)细胞,并分析其生物学特性.方法:取Wistar大鼠胎鼠小肠全长,按文献[3]方法制作小肠黏膜的类器官片段并制备成单细胞悬液.使用Hoechst33342和PI染色后用流式细胞仪分选SP细胞.提取分选前后的细胞总RNA和蛋白,用实时定量PCR及Western-blot方法分别检测其中MSI-1RNA及MSI-1蛋白的表达水平.结果:大鼠胎鼠来源的小肠黏膜单细胞悬液中包含一个特定的细胞群体-SP细胞,染色液中加入维拉帕米后,SP细胞被阻断后消失.定量PCR检测显示SP细胞中MSI-1mRNA水平是分选前的8.125倍,是非SP细胞的20.077倍.Western-blot结果显示MSI-1蛋白水平明显高于分选前.结论:大鼠胎鼠的小肠黏膜SP细胞富集小肠黏膜干细胞,与小鼠来源SP细胞生物学特性基本一致.
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新生小鼠肠边缘群细胞蛋白质组的差异蛋白分析
[目的]筛选肠道干细胞特征的差异蛋白质或蛋白质群.[方法]采用双向凝胶电泳方法分离新生小鼠肠边缘群细胞与肠上皮细胞总蛋白,选择差异表达超过1.5倍的蛋白质进行质谱分析及数据库搜索、鉴定.[结果]成功建立小鼠肠边缘群细胞与肠上皮细胞的双向电泳图谱,筛选出差异蛋白点39个,质谱分析及数据库搜索共鉴定出32种蛋白质.[结论]小鼠肠干细胞与上皮细胞的蛋白表达谱存在差异,鉴定出的32种蛋白质有可能成为潜在的、有应用价值的肠道干细胞鉴别分子标志.
