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β-Smac基因文献资料
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β-Smac基因的克隆及过表达对胃癌细胞SGC7901顺铂敏感性的影响
目的:分离,克隆编码β-Smac的基因,观察胃癌细胞SGC7901中β-Smac基闪过表达对顺铂敏感性的影响.方法:从胃癌细胞株SGC7901扩增β-Smac的cDNA.构建含β-Smac基因cDNA的表达载体pcDNA3.1-β-Smac.将pcDNA3.1-β-Smac质粒转入SGC7901细胞;用RT-PCR、Western blot分别从核酸和蛋白水平检测外源基因的表达情况.选用顺铂(0、2、8、12 μg/ml)处理转染pcDNA3.1(对照组)或pcDNA3.1-β-Smac(实验组)48 h后的SGC7901细胞24 h,流式细胞仪分析细胞凋亡百分率.结果:成功构建了含β-Smac基闽的表达质粒,核酸序列分析显示克隆的β-Smac基因序列与GeneBank中登记的β-Smac基因序列100%同源,引入的Flag序列完全正确.同对照组比较,实验组转染24 h后,SGC7901细胞β-Smac mRNA水平明显增高,48 h后Western blot在β-Smac预期位置检测到Flag蛋白特异性条带.顺铂处理24 h后,仅2 μg/ml组显示出实验组和对照组细胞凋亡差异有显著性(P=0.009),而其余各组间均未显示有统计学差异.结论:成功构建含β-Smac基因序列的重组质粒并转染靶细胞,外源性β-Smac基因过表达后,未显示能显著提高人胃癌细胞株SGC7901对顺铂的敏感性.
