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心肌缺血小型猪模型差异蛋白质组学研究
目的:筛选心肌缺血相关的蛋白质,以期发现心肌缺血特征性的差异蛋白质或蛋白质群.方法:对模型动物小型猪施行冠脉Ameroid环缩术,通过对模型动物的动态观察,综合评价,并参照WHO冠心病心绞痛诊断标准,明确术后28天符合心肌缺血诊断.术后28天,动物前腔静脉取血,血样处理后进行荧光差异蛋白电泳(2D-DIGE),对差异蛋白点进行MALDI-TOF/TOF分析,获取蛋白样品的肽质量指纹图.结果:共筛选出31个差异表达蛋白质点,其中17个蛋白质点在4周模型组中下调,14个蛋白点上调.对其中15个蛋白点采用质谱技术成功鉴定.白蛋白、血红素蛋白、烟酸受体在4周模型组中低表达,CH4 and secrete domain of Swine IgM、mutated immunoglobulin heavy chain、肌球蛋白、磷脂酶C、白细胞抗原相关酪蛋白磷酸酶相关蛋白、磷酸核糖焦磷酸相关蛋白-1、Ig gamma 4 chain constant region在4周模型组中高表达.结论:初步发现碱性磷酸酶、肌球蛋白、白细胞抗原相关酪蛋白磷酸酶相关蛋白、磷酸核糖焦磷酸合成酶相关蛋白1、血红素蛋白、烟酸受体可能与心肌缺血发生发展相关.
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缺血后处理心肌细胞线粒体比较蛋白质组学的研究
目的 以大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,利用蛋白质组学对纯化的大鼠心肌细胞线粒体进行分析和鉴定,探讨缺血后处理大鼠心肌细胞线粒体蛋白表达的变化.方法 24只大鼠随机分为正常组(Normal,Nor)、缺血再灌注损伤组(Control,Con)、缺血后处理组(ischemic postconditioning,IPO)、5-羟葵酸拮抗缺血后处理组(5-hydroxydecanoate,5-HD+IPO),利用Langendorff灌注装置构建各组大鼠离体心脏模型.以Nycodenz密度梯度离心法分离大鼠心肌线粒体,通过Western blot方法检测其纯度,提取各组线粒体蛋白,进行2D-DIGE分离,分析差异表达蛋白,进行MALDI-TOF-MS鉴定.结果 与Nor组比较,Con组NADH脱氢酶亚基(NDUFA10)表达水平降低3.84倍;IPO和Con组比较:NDUFA10和琥珀酸脱氢酶-黄素蛋白(SDHA)的蛋白表达水平分别减少3.33倍和1.68倍.与IPO组比较,5-HD+ IPO组的SDHA表达水平升高1.65倍.结论 心肌缺血再灌注损伤降低了NDUFA10蛋白的活性,可能在缺血后处理线粒体NADH呼吸链稳定的维持过程中发挥作用,SDHA蛋白和线粒体敏感性K+通道(mitoKATP)可能同时在缺血后处理内源性保护机制中具有作用.
