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脂联素通过AMPK/mTOR通路抑制H2O2诱导的大鼠髓核细胞凋亡及细胞外基质退变
目的:探讨脂联素(adiponectin,APN)对氧化应激下大鼠髓核细胞凋亡和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)退变的保护作用及相关机制.方法:原代培养SD大鼠髓核细胞,CCK-8法检测细胞活力,以确定APN的适保护浓度.将细胞分为对照组、H2O2组、APN+H2O2组及Compound C+APN+H2O2组,流式细胞术检测凋亡率,Western blot检测Bcl-2、Bax、CleavedCaspase-3、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)及带有血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解整链蛋白金属蛋白酶-5(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs-5,ADAMTS-5)等蛋白的表达,RT-PCR检测Ⅱ型胶原(collagen typeⅡalpha 1 chain,COL2A1)、蛋白聚糖(aggrecan,ACAN)的mRNA水平,Western blot评估5’-单磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine 5’-monophosphate-activated protein kinase,AMPK)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的磷酸化水平.结果:1μg/mL APN对200 μmol/LH2O2所致的细胞毒性起佳拮抗作用.APN预处理显著抑制H2O2诱导的髓核细胞凋亡.相应地,Bax/Bcl-2比值及Cleaved Caspase-3表达的增加也被APN抑制.尽管对ADAMTS-5无明显抑制作用,APN降低了H2O2诱导的MMP-13的表达.此外,H2O2对COL2A1及ACAN转录的抑制作用也被APN显著缓解.APN还促进AMPK磷酸化并抑制mTOR磷酸化,而AMPK抑制剂Compound C显著减轻了APN对mTOR磷酸化的抑制作用.APN对凋亡、分解代谢的抑制作用及其对合成代谢的促进作用也均被Compound C逆转.结论:APN通过AMPK/mTOR通路抑制H2O2诱导的大鼠髓核细胞凋亡及ECM退变.
关键词： 脂联素 髓核细胞 凋亡 细胞外基质退变 AMPK/mTOR通路
