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MYH9综合征的免疫光检测与基因分析
目的 研究两个MYH9综合征家系中性粒细胞包涵体的本质及基因突变.方法 瑞氏染色观察先证者及其家系患者的外周血片血小板和中性粒细胞的特殊形态.间接免疫荧光方法结合DAPI复染技术观察正常对照和患者血片非肌性肌球蛋白ⅡA的亚细胞定位.从先证者及家系成员外周血中自细胞中提取基因组DNA,PCR扩增MYH9的40个外显子及侧翼内含子序列,检测其基因突变.结果 患者外周血片中性粒细胞胞浆中可见明显团块状、半月形的绿色荧光聚集,其大小、位置与瑞氏染色的中性粒细胞包涵体相同.Fechtner综合征MYH9基因改变为外显子40第5981位核苷酸C→T杂合改变,使第1933位密码子(CGA,编码Arg)突变为终止密码TGA.May-Hegglin异常MYH9基因改变为外显子38第5701位核苷酸G→A杂合改变,使1841位谷氨酰氨变为赖氨酸.结论 建立了诊断MYH9综合征的一种独特的免疫荧光方法.R1933X和E1841K杂合改变是导致Fechtner综合征和May-Hegglin异常的原因.
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MYH9相关综合征患者血小板和中性粒细胞的超微结构及其病理特点
目的:研究MYH9相关综合征(MYH9-RD)患者血小板、中性粒细胞的超微结构及其病理特点.方法:采用光学显微镜和透射电镜观察患者外周血的中性粒细胞、血小板及其细胞器形态结构特点.结果:患者具有“巨大血小板、血小板数量减少和中性粒细胞包涵体”三联征;各血小板所含的细胞器数量差异明显,多数血小板的微管系统、α颗粒和致密颗粒数量与血小板体积成比例增加.在所统计的血小板中,有约85％的线粒体肿胀明显,62％的开放管道数量增多,90％血小板有伪足伸出.巨大血小板中有被微管和内质网包围的特殊区域,形态与中性粒细胞包涵体类似.结论:非肌肉肌球蛋白重链ⅡA(NMMHC-ⅡA)异常导致血小板细胞器分布不均、开放管道数量增加,可能是MYH9-RD患者血小板一直处于被激活状态的重要因素.
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MYH9-RD患者中性粒细胞包涵体的定位和本质鉴定
目的 检测和分析非肌性肌球蛋白重链ⅡA(NMMHC-ⅡA)在MYH9-RD患者中性粒细胞胞浆中的定位及表达,以确定包涵体的构成本质.方法 应用间接免疫荧光技术,观察MYH9-RD患者及正常对照者NMMHC-ⅡA在胞浆中的定位和分布情况；应用Western blot技术检测和分析中性粒细胞中NMMHC-ⅡA在患者和正常对照者之间蛋白表达水平的差异.结果 免疫荧光技术清楚地显示了患者中性粒细胞胞浆中呈绿色荧光的“梭形”包涵体的形态和轮廓,与瑞特姬姆萨染色显示的包涵体形状、大小基本一致,但更为清晰；而正常对照者除有散点状的荧光斑点外,无包涵体形成；Western blot结果显示患者NMMHC-ⅡA表达量较正常对照者降低.结论 MYH9-RD患者中性粒细胞包涵体的主要成份是NMMHC-ⅡA,NMMHC-ⅡA的显阴性作用导致了包涵体的形成.
