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Taq RecA蛋白的克隆表达及其在SNP基因分型中的应用
目的 研究克隆表达的Taq RecA蛋白作为一种添加剂在单核苷酸多态性(SNP)基因型分析中的作用.方法 构建pET-28a-Taq RecA表达质粒,在BL21(DE3)菌株中诱导表达,用热变性和饱和硫酸铵沉淀法去除部分杂蛋白,再经Ni-NTA亲和层析柱纯化分离Taq RecA蛋白；用PCR和等位基因特异性PCR (AS-PCR)方法研究其增强特异性和在SNP基因分型中提高分型准确性的作用.结果 成功构建了表达质粒,表达纯化得到较高纯度蛋白,用于SNP基因分型中减少了非特异性产物,提高了分型准确性.结论 Taq RecA蛋白作为一种PCR中的添加剂,在ATP辅助作用下,适量添加能提高AS-PCR介导的SNP基因分型的准确度.
关键词： RecA蛋白 单核苷酸多态性 等位基因特异性聚合酶链式反应 -
RecA蛋白-互补单链DNA探针提高压电基因传感器灵敏度的实验研究
目的研究利用RecA蛋白-互补单链DNA探针与固定的肽核酸(bis-PNA)探针相结合提高压电基因传感器的灵敏度的可行性.方法基因传感器阵列固定上针对乙肝病毒的bis-PNA探针,加入靶DNA与之反应,然后加入预先处理过的的RecA蛋白-互补单链DNA探针.结果直接加入靶DNA所引起的频率改变为15.83±7.31Hz,反应时间为45.16±12.87min,加入RecA蛋白-互补单链DNA探针(浓度为3.0mg/ml),所引起的频率改变为明显,为112.16±12.7Hz.结论在反应体系中加入RecA蛋白-互补单链DNA探针,能有效地提高压电基因传感器的灵敏度,明显缩短反应体系时间.
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漏声表面波传感器生物信号放大系统的研究
目的 研究利用"RecA蛋白-互补单链DNA"探针与bis-PNA/dsDNA复合物相结合,作为生物信号放大系统提高传感器检测灵敏度的可行性.方法 漏声表面波传感器检测通道金膜表面先固定针对人乳头瘤病毒(HPV)的bis-PNA探针,加入HPV基因组DNA与之完全反应后,再加入不同浓度的"RecA蛋白-互补单链DNA"探针,在反应过程中加入ATPγS提供能量,分别探索优化RecA蛋白及ATPγS的佳反应浓度.结果 当RecA蛋白浓度为45 μg/ml,所引起的相位变化值为(11.74±1.03)°,显著高于其他浓度组(P＜0.01);在佳RecA蛋白浓度下,当ATPγS浓度为2.5 mmol/L时,所引起的相位变化值为(10.71±0.73)°,显著高于其他ATPγS浓度组(P＜0.01).结论 "RecA蛋白-互补单链DNA"探针复合体与bis-PNA/dsDNA复合物相结合可以有效提高传感器的检测灵敏度,并明显缩短检测时间.
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"RecA蛋白-互补单链DNA探针"生物信号放大系统用于压电基因传感器的研究
目的利用"RecA蛋白-互补单链DNA探针"与固定的肽核酸(bis-PNA)探针相结合,摸索适的液相反应条件,以提高压电基因传感器基因传感表面的质量负载,从而提高传感器的灵敏度.方法基因传感器阵列固定上针对乙肝病毒的bis-PNA探针,加入靶DNA与之反应,然后加入预先处理过的不同浓度(0.5～6mg/ml)的"RecA蛋白-互补单链DNA探针".结果当RecA蛋白浓度为3mg/ml时,ATPγS浓度为12.5μM,所引起的频率变化显著.结论在反应体系中加入"RecA蛋白-互补单链DNA探针",有效的提高了压电基因传感器的灵敏度.
