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PNA与DNA探针对漏声表面波传感器特异性的影响
目的 探讨以PNA作为杂交探针与普通的DNA探针相比,在漏声表面波生物传感器生物杂交反应中的优越性.方法 用巯基固定法将PNA、DNA两种探针分别固定在漏声表面波生物传感器的金膜表面,分别与完全匹配、1个及2个碱基错配的靶序列进行杂交反应,观察两种不同的探针与靶序列反应所引起的相位变化及反应平衡时间.结果 与DNA探针相比,PNA探针识别碱基错配的能力显著提高,且杂交平衡时间更短.结论 PNA探针可提高漏声表面波生物传感器的检测特异性.
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漏声表面波生物传感器液相检测系统的构建及检测HPV的实验研究
目的 建立漏声表面波生物传感器液相检测技术平台,并用该检测系统实时检测人乳头瘤病毒(HPV). 方法 构建检测和参比双路延迟线,并观察在液相中两路延迟线的相位变化规律;以人乳头瘤病毒为检测对象,用传感器检测系统对其进行实时检测. 结果 两路延迟线的相位值在液相中发生不同的变化;检测HPV时,检测延迟线的相位值发生较大的变化,而参比通道的相位曲线变化不是很大. 结论 成功构建了漏声表面波生物传感器液相检测技术平台,并实现对双链DNA病毒HPV实时检测反应.
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离子强度对乙型脑炎病毒基因传感器检测系统的影响
目的 探讨磷酸盐缓冲液(PBS)中Na+浓度值对乙型脑炎病毒(JEV)基因传感器检测系统的影响.方法 漏声表面波(LSAW)基因传感器表面固定终浓度为1.0μmol/L的乙型脑炎病毒探针,然后分别在pH 7.6的10 mmol/L PBS缓冲液(含Na+浓度值0.1～0.6 mol/L)中和终浓度为1.0 μmol/L的JEV靶序列杂交,分别记录相位变化及反应所需时间.结果 杂交反应引起的相位变化是先上升后趋于缓和的趋势,以0.3 mol/L Na+浓度为分界线;杂交平衡时间同相位变化一致,当PBS中Na+浓度为0.3 mol/L,杂交反应的平衡时间为33 min.结论 随着Na+浓度的升高,杂交反应引起的相位变化呈典型的饱和曲线趋势,PBS中Na+浓度0.3 mol/L,杂交反应平衡时间33 min,是LSAW-JEV基因传感器杂交的适反应条件.
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漏声表面波生物传感器不同检测方法的实验研究
目的 构建双通道漏声表面波生物传感器液相检测技术平台.方法 以人乳头状瘤病毒为检测对象,传感器检测系统运用相位、频率及延迟线3种检测方法 对其进行实时检测;利用扫描隧道显微镜观察传感器裸金表面、固定巯基化探针以及核酸杂交后的金膜表面结构的微观变化.结果 相位和频率两种检测方法 较好;扫描隧道显微镜下可以看到裸金膜表面金原子排列有序;探针分子分布密度增加;杂交后寡核酸分子密度更为密集.结论 成功构建了漏声表面波生物传感器液相检测技术平台并运用多种检测方法 ;扫描隧道显微镜可以形象直观地对传感器金膜表面、核酸杂交进行直接观察,结果 进一步证实了实验结论 的正确性.
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漏声表面波生物传感器直接快速检测病原体DNA的实验研究
目的 应用漏声表面波生物传感器直接检测从临床标本中提取的HPV基因组DNA.方法 选取36例临床确诊为宫颈癌的患者,提取其生殖器分泌物的基因组DNA,并经荧光定量PCR检测为HPV阳性的标本,以14例健康志愿者为阴性对照;利用漏声表面波生物传感器检测临床样本,并与荧光定量PCR法进行方法学比较.结果 传感器法检测35例标本为阳性,阳性率为97.22%,而荧光定量PCR法检测36例均为阳性;14例阴性对照标本中,两种方法的检测结果均为阴性;传感器法的检测限为1.21 pg/L.结论 传感器法与荧光定量PCR法差异无统计学意义,一致性较好,且漏声表面波生物传感器实现了对临床标本中HPV基因组DNA的直接快速检测.
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漏声表面波生物传感器的研究现状及应用
生物传感器由于集高效、灵敏、特异、结构小巧、经济实用等优点于一身,目前已成为生命科学领域的研究热点[1] .它利用各种类型的换能器,将待测的生物信号转换为声、光、电等可检测的物理信号,从而实现对样本中靶生物分子的检测.随着声学技术的迅猛发展,近年来出现了一系列漏声表面波(LSAW)传感器,这种传感器广泛应用于测量温度、质量及液体密度等物理参数[2,3] .LSAW传感器是继陶瓷、半导体、光纤等传感器之后逐步发展起来的一种新型传感器[4,5] ,它综合了物理、材料、微电子、信号处理、工艺等众多学科知识,是一个技术密集的领域.
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乙型脑炎病毒靶序列浓度对LSAW基因传感器检测系统的影响
目的 探讨乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis vires,JEV)靶序列浓度值对漏声表面波(LSAW)基因传感器检测系统的影响.方法 LSAW基因传感器表面固定终浓度为0.5 μmol/L的JEV探针,然后用pH 7.6的10 mmol/L PBS缓冲液(含Na+ 0.3 mol/L)中和终浓度为0.05、0.1、0.5、1.0、1.5、2.0 μmoL/L的JEV靶序列杂交,分别记录相位变化及反应所需时间.结果 与JEV探针反应引起的相位变化是先缓慢上升后趋于缓和的趋势,以1.0 μmol/L靶序列浓度为分界线;杂交平衡时间上除0.05 μmol/L的时间短以外,其他的未见明显变化趋势,当靶序列浓度为1.0 μmol/L,杂交反应平衡时间为33 min.结论 随着靶序列浓度的升高,杂交反应引起的相位变化呈典型的饱和曲线趋势;靶序列浓度为1.0 μmol/L、杂交反应的平衡时间为33 min,是LSAW基因传感器杂交的适反应条件.
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漏声表面波传感器生物信号放大系统的研究
目的 研究利用"RecA蛋白-互补单链DNA"探针与bis-PNA/dsDNA复合物相结合,作为生物信号放大系统提高传感器检测灵敏度的可行性.方法 漏声表面波传感器检测通道金膜表面先固定针对人乳头瘤病毒(HPV)的bis-PNA探针,加入HPV基因组DNA与之完全反应后,再加入不同浓度的"RecA蛋白-互补单链DNA"探针,在反应过程中加入ATPγS提供能量,分别探索优化RecA蛋白及ATPγS的佳反应浓度.结果 当RecA蛋白浓度为45 μg/ml,所引起的相位变化值为(11.74±1.03)°,显著高于其他浓度组(P＜0.01);在佳RecA蛋白浓度下,当ATPγS浓度为2.5 mmol/L时,所引起的相位变化值为(10.71±0.73)°,显著高于其他ATPγS浓度组(P＜0.01).结论 "RecA蛋白-互补单链DNA"探针复合体与bis-PNA/dsDNA复合物相结合可以有效提高传感器的检测灵敏度,并明显缩短检测时间.
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缓冲液pH值对LSAW-bisPNA传感器检测系统的影响
目的 探讨PBS缓冲液pH值对LSAW-bisPNA基因传感器检测系统的影响.方法 LSAW-bisPNA基因传感器表面固定终浓度为1.0 μmol/L的bis-PNA探针,然后分别在pH 5.8～8.0的PBS缓冲液中和相应的靶序列杂交,记录相位变化及反应所需时间.结果 在不同pH值缓冲液中,bis-PNA与靶序列反应引起的相位变化有明显差异(P＜0.01),pH 6.6与pH 6.8时传感器响应信号大,但两者反应所达到的平衡时间有明显差异(P＜0.05),pH值6.6时检测所需时间更短.结论 选择pH 6.6作为bis-PNA和靶序列dsDNA反应的适pH值,在该pH值条件下传感器响应信号大,反应达平衡时间短.
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新型漏声表面波生物传感器液相检测条件的实验研究
目的探讨漏声表面波生物传感器液相检测系统的影响因素.方法构建检测和参比双路延迟线,并观察在不同影响因素如离子浓度、缓冲液pH值及不同粘度的甘油PBS溶液中两路延迟线的相位变化规律.结果检测延迟线声表面波信号的相位值随溶液粘度、离子浓度、pH值的增大而发生明显的变化,而参比通道的相位曲线变化不明显.＃结论成功构建了漏声表面波生物传感器液相检测检测技术平台,并探索了溶液的粘度、离子浓度、pH等因素对传感器的影响.
