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人血小板膜糖蛋白GPIbα(H1-V289)的原核表达及其生物活性研究
目的 获得重组的血小板膜糖蛋白GPIbα的N端片段(1-289氨基酸),进一步研究其在血栓与止血过程中的生物功能.方法 利用质粒pCMV3(编码GPIbαH1-V289)设计引物,构建pQE30-GPIbα(H1-V289)表达载体,转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达蛋白.用Ni-NTA琼脂糖层析柱不同pH值梯度淋洗法纯化蛋白,SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化产品纯度和免疫学活性,并观察重组蛋白对瑞斯托霉素和ADP诱导血小板聚集的影响.结果 成功获得纯度较高的重组GPIbα(H1-V289)蛋白,浓度为0.6 mg/ml.Western blot检测结果显示,抗GPIbα单抗SZ2能在34 kd区域显示条带.而且纯品能有效抑制瑞斯托霉素诱导的血小板聚集,对ADP诱导的反应无抑制作用.结论 重组蛋白具有较好的免疫原性和生物活性,并可以大量获得,为开发抗血栓药物奠定了基础.
关键词： 血小板膜糖蛋白GPIbα 血小板聚集 瑞斯托霉素 -
眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A抗血小板聚集作用及机制
目的 研究中华眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A对血小板聚集的影响及其相关的机制.方法 测定atrase A对磷酸腺苷、胶原、血小板活化因子、花生四烯酸、瑞斯托霉素、凝血酶诱导血小板聚集的影响情况,并通过蛋白质免疫印迹检测atrase A对血小板膜糖蛋白和血管假血友病因子的酶切情况.结果中华眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A能明显抑制由瑞斯托霉素和凝血酶诱导的血小板聚集,这种抑制作用呈量效、时效关系.而atrase A和血小板预孵5 min后对磷酸腺苷、胶原、血小板活化因子、花生四烯酸诱导的血小板聚集有微弱的抑制作用,预孵时间延长至30 min对血小板聚集有明显的抑制作用.蛋白质免疫印迹结果显示atrase A能特异性酶切血小板膜糖蛋白GPIb,但对vWF几乎没有酶切作用.结论中华眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A对磷酸腺苷、胶原、血小板活化因子、花生四烯酸、瑞斯托霉素、凝血酶诱导的血小板聚集均有抑制作用,其中对瑞斯托霉素和凝血酶诱导的血小板聚集具有明显的抑制作用,其机制是通过酶切血小板膜糖蛋白GPIb.
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血管性血友病
von Willebrand disease(vWD)为常染色体显性或隐性遗传的先天性出血性疾病,系von Willebrandfactor(vWF)缺乏或功能异常所致.vWF为一大分子糖蛋白,在内皮细胞与巨核细胞中合成,存在于血浆与血小板中.vWF的功能有2:(1)介导内皮下胶原与血小板黏附,促进血小板血栓形成,致使其在小血管损伤后产生止血功能;(2)结合并运输FⅧ,使后者稳定不被破坏.
