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端粒结合因子-1在脑膜瘤中的表达及临床意义
目的 探讨端粒结合因子-1(TRF1)在脑膜瘤及正常脑组织中的表达及其临床意义.方法 选取26例脑膜瘤(其中良性脑膜瘤18例,恶性脑膜瘤8例)和10例正常脑组织(脑外伤患者内减压切除的脑组织)石蜡切片标本作为研究对象,应用免疫组化技术检测各组TRF1的表达水平,应用半定量法计算不同标本肿瘤细胞免疫标记的频率和强度积分.结果 所有肿瘤组织及正常脑组织中均检测到TRF1表达,其中正常脑组织中TRF1表达高积分构成比为90.00%,良性脑膜瘤的TRF1高积分构成比为66.67%,恶性(间变性)脑膜瘤组为12.50%.经统计分析发现,TRF1在脑膜瘤中的表达与其恶性程度成负相关(rs=-0.586,P=0.002).结论 TRF1在人脑膜瘤组织及正常脑组织中均有广泛表达,其在脑膜瘤中的表达水平与其恶性程度呈负相关,TRF1可作为脑膜瘤病理分级及恶性程度判断的参考指标.
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TRF1 219位磷酸化在细胞周期调控中的作用研究
目的:研究端粒结合因子-1(TRF1)丝氨酸219位磷酸化对细胞周期的影响.方法:突变TRF1的219位氨基酸,构建模拟磷酸化和非磷酸化状态的突变体TRF1S219D-GFP和TRF1S219A-GFP,核苷酸测序和免疫印迹验证目的基因序列及蛋白表达.将野生型和突变体质粒用脂质体转染法转入HeLa细胞,观察它们在细胞中的定位、流式细胞仪检测各细胞周期的细胞数量、免疫印迹检测转染后ATM蛋白水平的改变.结果:测序证实突变成功,GFP抗体免疫印迹证实了突变体的蛋白表达.荧光显微镜下观察到TRF1S219A-GFP和TRF1S219D-GFP均呈点状定位于细胞端粒.流式细胞仪结果显示,过表达野生型和非磷酸化突变体的HeLa细胞产生G2/M期的阻滞(P＜0.05).转染野生型和突变体后HeLa细胞中ATM蛋白含量均比对照组增高.结论:ATM激酶对TRF1丝氨酸219位的磷酸化可以抑制由于TRF1过量表达而引起的细胞周期G2/M期的阻滞.
