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人PBMC和脐血CD34+细胞诱导DC2的实验方法研究
目的:探讨从人外周血单个核细胞(PBMC)和脐血CD34+造血干细胞(HSC)诱导DC2方法.方法:分别用rhIL-3(10ng/ml)+rhG-CSF(100ng/ml)和rhFlt-3L(100ng/ml)+rhIL-3(10ng/ml)+rhG-CSF(100ng/ml)诱导人PBMC和脐血CD34+HSC向DC2分化,并采用流式细胞仪分析细胞的表型,同时观察rhTNF-α和人CD40单抗诱导DC2分化成熟的作用.结果:rhG-CSFh+rhIL-3未能较好地从PBMC中诱导出DC2,但是从富集的脐血CD34+HSC用rhFlt-3L+rhIL-3+rhG-CSF诱导,可以获得相对较多的DC2,并有较高的扩增效率,但离临床研究和应用还有一定距离,因此DC2的诱导方法仍需进一步优化.人CD40单抗和rhTNF-α一样,能有效地诱导DC2分化成熟.结论:体外联合多种细胞因子从CD34+HSC成功地诱导出DC2,抗人CD40单抗有利于DC2的活化成熟.
关键词： CD34+造血干细胞 rhFlt-3L rhIL-3 rhG-CSF DC2 -
抗CD40抗体联合诱导人脐血CD34+造血干细胞向DC2分化的作用
目的探讨从脐血CD34+造血细胞诱导DC2的方法及CD40分子在DC2分化诱导中的作用.方法运用磁珠从脐血中分离出CD34+造血干细胞,以rhIL-3(10 ng/mL)、rhFlt-3L(100 ng/mL)和rhGM-CSF(100 ng/mL)诱导其向DC2分化,采用流式细胞仪分析DC2表型,并观察抗人CD40单克隆抗体诱导DC2分化成熟的作用.结果人脐血CD34+造血细胞在rhIL-3、rhFlt-3L和rhGM-CSF联合诱导培养12 d,获得具有DC2样(淋巴样DC)形态的细胞,然后分别加入rhIL-3+抗人CD40 mAb(Ⅰ组)或rhIL-3+TNF-α(Ⅱ组)诱导DC2的分化成熟,流式细胞仪分析细胞表型,发现Ⅰ组和Ⅱ组Lineage-(CD3、CD14、CD16、CD19、CD56)CD123+细胞的HLA-DR、CD83、CD86、CD80表达率分别为88.78%、37.38%、32.83%和99.08%;78.87%、32.29%、29.57%和98.86%.结论体外联合多种细胞因子从CD34+造血细胞成功地诱导出富集DC2表型的细胞,抗人CD40 mAb可以促进DC2的分化成熟.
