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抗人钠碘转运体单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立与初步鉴定
目的制备抗人钠碘转运体(NIS)单克隆抗体.方法以人NIS蛋白质的二个片段(第2膜外段和第14f段)为抗原免疫小鼠,运用杂交瘤技术,制备鼠抗人NIS单克隆抗体(rhNIS MAb),采用小鼠Ig亚类测定试剂条测定单抗的亚类,并通过ELISA、Western-blot、免疫组化技术等鉴定其特异性.结果运用杂交瘤技术成功地制备出能稳定分泌抗人NIS单克隆抗体的细胞系.Western-blot分析表明:此单抗所识别的靶分子的相对分子量主要在97KD,免疫组化染色显示:甲状腺滤泡细胞基底膜上有棕黄色着色.结论成功地制备出抗人NIS单克隆抗体,为NIS抗原-抗体的研究提供了新的工具,NIS单克隆抗体不仅可以应用于甲状腺、乳腺等领域的基础研究,而且可以用于临床,为甲状腺疾病的诊断和治疗提供切实保障.
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pEGFP-C3-hNIS重组质粒的构建及其在人胃癌BGC-823细胞的表达
目的 构建人钠碘转运体( hNIS)基因真核绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C3-hNIS,并研究重组hNIS基因在人胃癌BGC-823细胞中的表达情况.方法 采用Trizol一步法从甲状腺手术患者的甲状腺组织中提取总RNA,利用RT-PCR方法扩增得到hNIS的可编码区基因,并克隆到T载体上,测序后亚克隆到真核绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C3的多克隆位点,获得重组真核表达载体pEGFP-C3-hNIS.分别将pEGFP-C3-hNIS重组质粒(实验组)和pEGFP-C3(对照组)瞬时转染至人胃癌BGC-823细胞中,转染48 h后,于荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达情况,并通过Western blot方法检测hNIS基因的蛋白表达水平.结果 序列分析证实克隆片段与GenBank公布的hNIS基因序列(序列号:NM-000453)相似性达99.90％.转染48 h后,实验组与对照组细胞均可观察到较强绿色荧光信号,用hNIS基因特异性抗体检测表明实验组hNIS表达水平明显高于对照组.结论 成功构建hNIS真核绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C3-hNIS,并能在人胃癌BGC-823细胞中高表达.
关键词： 胃肿瘤 人钠碘转运体 基因克隆 真核绿色荧光蛋白表达载体 转染
