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造血干/祖细胞移行能力及影响因素的实验研究
目的研究纯化脐血CD34+细胞移行穿越血管内皮细胞能力及影响因素.方法免疫微磁珠阳性选择法(MACs)纯化脐血CD34+细胞,流式细胞仪测定基质细胞衍生因子(SDF-1α)受体(CXCR4)表达率;与干细胞因子(SCF)、白介素(IL)-6,IL-3及flt3配体(FL)共同孵育12小时,静脉内皮细胞株(ECV)接种于transwell滤膜上层,研究CD34+细胞在SDF-1α作用下移行穿越ECV的能力,transwell滤膜孔径为8μm,并观察阻断其表面粘附分子(CD62L、CD62E和VLA-4)后对迁移的影响.结果 CD34+细胞在自然状态下也能少量通过ECV细胞层,SDF-1α可显著提高CD34+细胞移行能力,通过率与CD34+细胞表面CXCR4表达相关;CD34+细胞与SCF及IL-6共同孵育后,可明显提高其穿越ECV细胞的能力(P＜0.01);单独或联合应用抗粘附分子抗体显著减少CD34+细胞的穿内皮细胞移行(P＜0.01).结论 CD34+细胞可穿过ECV内皮细胞层向SDF-1α浓度高的一侧移行,与IL-6和SCF共同培养后可增强CD34+细胞的移行能力,抗粘附分子单抗显著减少CD34+细胞的移行.
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荷瘤SCID小鼠脐血移植后免疫功能变化的研究
目的 探讨脐血造血干/祖细胞移植重建荷瘤SCID鼠的免疫学机制是否为负荷人肿瘤激活人源性免疫功能.方法 首先培养人肝癌高转移细胞株HCCLM.细胞,然后以HCCLM6细胞株在脐血移植免疫功能重建组(A组)SLID鼠皮下建立荷瘤模型,脐血移植免疫功能重建B组未荷瘤作为对照.实验动物于5周后处死,分别进行以下检测:(1)比较A、B两组之间免疫功能指标变化情况,即用流式细胞仪分析小鼠外周血有核细胞中人淋巴细胞比例,ELISA法测定人IgG含量.(2)比较B组第6周与第11周时免疫功能指标变化情况.结果 (1) HCCLM6细胞株接种于A组SLID小鼠皮下成瘤率为100%,成瘤潜伏期为(9.83±1.47) d;接种后5周移植瘤体积为(539.22±94.08) mm3,.5周后SCID小鼠外周血有核细胞中人淋巴细胞比例CD3+、CD4+/CD8+分别为:A组(1.50±0.40)%,(2.17±0.88);B组(2.17±0.50)00,(1.19±0.66),两组比较,PCD3＝0.04、PCD4/CD8=0.08.人IgG含量分别为(48.57±4.51) pg/mL,(61.68±5.66) μg/mL,两组比较P<0.01,有统计学差异.(2)B组中人淋巴细胞比例CD3+、CD4+/CD8+及人IgG含量第6周与第11周时分别为(1.60±0.32)、%(2.36±0.74)、(50.13±1.27) μg/mL与(1.50±0.40)%、(2.17±0.88)、(48.57±4.51) Kg/mL.可以看出T淋巴细胞在第6周时已达高峰并可维持到第11周尚无明显变化,而IgG含量虽有所下降,但并无统计学差异(P>0.05).结论 肿瘤负荷状态会对免疫功能产生影响,即重建免疫的SCID鼠负荷人肿瘤激活人源性免疫从而增强其免疫功能,因而脐血干细胞移植有可能成为肝癌治疗的一种新方法.
