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人胚中脑神经干细胞的体外分离培养及分化的研究
本文对人胚中脑神经干细胞体外分离培养及分化进行了初步研究,以期为神经干细胞临床应用提供实验依据.材料和方法一、原代中脑神经干细胞的分离培养:取胚龄10~13周水囊引产的新鲜人胚胎,在显微镜下无菌分离出胚胎中脑组织,剥除脑膜及表面血管,在PBS液中漂洗三次,用细吸管反复吹打组织碎块至完全散开,离心洗涤后吹打制成细胞悬液,经100目不锈钢滤网过滤,制成单细胞悬液,加入含B27(1∶50)(GibcoBRL)和EGF(Serotec.)20 ng/ml、bFGF(Chemicon)20 ng/ml的DMEM/F12(1∶1)(GibcoBRL)无血清培养基,台盼蓝染色计数活细胞,调整活细胞浓度为1×105/ml,将原代细胞种植于25平方厘米培养瓶(8 ml细胞悬液/瓶),37℃,5%CO2条件下静置培养.